简述外植物灭菌方法及(植物组织培养中灭菌的方法主要有哪些)

1.植物组织培养中 灭菌的方法主要有哪些

1.湿热灭菌法 通过加压提高蒸汽温度，用高压蒸汽灭菌，穿透力强，温度高，灭菌效果最好。

注意事项：1.完全排除高压灭菌器内的冷空气。有冷空气存在时，在同一表压下所达到的温度值要低，而冷空气排出越少，温度就低得越多。

在高压蒸汽灭菌时，为保证达到规定的温度，必须将冷空气完全排除。否则，虽然压力达到，而温度达不到规定的要求，灭菌就不彻底。

2.紫外线 杀菌谱广，但穿透力弱，影响因素多，杀菌效能受到一定限制。 紫外线消毒效果与紫外线强度、照射时间、温度与湿度等因素有关。

我国规定紫外灯照射强度距离1m处不低于70μw/cm2。一般紫外灯使用超过100h，则应更换。

表面有尘土，降低灭菌效果。紫外灯杀菌的温度以20~40℃，相对湿度40%~60%为宜。

3干热灭菌法。灼烧与火焰灭菌：灼烧主要是用于工具灭菌，在火焰上灼烧即可达到彻底灭菌，火焰灭菌通常用于无菌操作中，将试管口、玻璃瓶口、硅氟塑料塞等反复通过火焰数次，利用火焰对管口等进行灭菌，阻止管口污染，作为无菌操作过程中的辅助灭菌手段。

4干烤灭菌：利用热辐射及干热空气进行灭菌。一般将待检灭菌的物品如金属、玻璃、陶瓷制品包装后，均可在烤箱内干热灭菌。

通常加热至160℃，保温2h可完全灭菌。但不宜超过170℃，玻璃量具易变形。

降温过速，骤冷易引起玻璃器皿炸裂。干热灭菌时装入干烤箱内的物品切勿紧密，应有空隙，利于热空气流动，过密，致使温度不均，部分物品灭菌不彻底。

2.灭菌方法有哪些

1.干热灭菌法

1.1灼烧与火焰灭菌：灼烧主要是用于接种工具灭菌，在火焰上灼烧即可达到彻底灭菌，火焰灭菌通常用于无菌操作中，将试管口、玻璃瓶口、硅氟塑料塞等反复通过火焰数次，利用火焰对管口等进行灭菌，阻止管口污染，作为无菌操作过程中的辅助灭菌手段。

1.2干烤灭菌：利用热辐射及干热空气进行灭菌。一般将待检灭菌的物品如金属、玻璃、陶瓷制品包装后，均可在烤箱内干热灭菌。通常加热至160℃，保温2h可完全灭菌。但不宜超过170℃，玻璃量具易变形。降温过速，骤冷易引起玻璃器皿炸裂。干热灭菌时装入干烤箱内的物品切勿紧密，应有空隙，利于热空气流动，过密，致使温度不均，部分物品灭菌不彻底。

2.湿热灭菌法

通过加压提高蒸汽温度，用高压蒸汽灭菌，穿透力强，温度高，灭菌效果最好。

注意事项：1.完全排除高压灭菌器内的冷空气。有冷空气存在时，在同一表压下所达到的温度值要低，而冷空气排出越少，温度就低得越多。在高压蒸汽灭菌时，为保证达到规定的温度，必须将冷空气完全排除。否则，虽然压力达到，而温度达不到规定的要求，灭菌就不彻底。

3.紫外线 杀菌谱广，但穿透力弱，影响因素多，杀菌效能受到一定限制。

紫外线消毒效果与紫外线强度、照射时间、温度与湿度等因素有关。

我国规定紫外灯照射强度距离1m处不低于70μw/cm2。一般紫外灯使用超过100h，则应更换。表面有尘土，降低灭菌效果。紫外灯杀菌的温度以20~40℃，相对湿度40%~60%为宜。

3.在食用菌栽培中紫外线灭菌应注意什么

紫外线消毒注意事项：

1、严禁频繁启动紫外线杀菌仪，特别是在短时间内，以确保紫外灯管寿命。

2、定期清洗：根据水质情况，紫外线杀菌灯管和石英玻璃套管需要定期清洗，用酒精棉球或纱布擦试灯管，去除石英玻璃套管上污垢并擦净，以免影响紫外线的透过率，而影响杀菌效果。

3、更换灯管时，先将灯管电源插座拔掉，抽出灯管，再将擦净的新灯管小心地插入杀菌器内，装好密封圈，检查有无漏水现象，再插上电源。注意勿以手指触及新灯管的石英玻璃，否则会因污点影响杀菌效果。

4、预防紫外线辐射：紫外线对细菌有强大的杀伤力，对人体同样有一定的伤害，启动消毒灯时，应避免对人体直接照射，必要时可使用防护眼镜，不可直接用眼睛正视光源，以免灼伤眼膜.

4.培养基,培养器皿和植物材料通常怎样灭菌

常用的灭菌方法可分为物理的和化学的两类，即：物理方法如干热（烘烧和灼烧）、湿热（常压或高压蒸煮）、射线处理（紫外线、超声波、微波）、过滤、清洗和大量无菌水冲洗等措施；化学方法是使用升汞、甲醛、过氧化氢、高锰酸钾、来苏水、漂白粉、次氯酸钠、抗菌素、酒精化学药品处理。

这些方法和药剂要根据工作中的不同材料不同目的适当选用。1、培养基用湿热灭菌 培养基在制备后的24小时内完成灭菌工序。

高压灭菌的原理是：在密闭的蒸锅内，其中的蒸汽不能外溢，压力不断上升，使水的沸点不断提高，从而锅内温度也随之增加。在0.1mpa的压力下，锅内温度达121℃。

在此蒸汽温度下，可以很快杀死各种细菌及其高度耐热的芽孢。注意完全排除锅内空气，使锅内全部是水蒸气，灭菌才能彻底。

高压灭菌放气有几种不同的做法，但目的都是要排净空气，使锅内均匀升温，保证灭菌彻底。常用方法是：关闭放气阀，通电后，待压力上升到0.05mpa时，打开放气阀，放出空气，待压力表指针归零后，再关闭放气阀。

关阀再通电后，压力表上升达到0.1mpa时，开始计时，维持压力0.1-0.15mpa,20分钟。按容器大小不同，保压时间有所不同。

见表1。该表所列数字是彻底灭菌很保险的数字，如果容器体积较大，但是放置的数量很少，也可以减少时间。

表1. 培养基高压蒸汽灭菌所必需的最少时间 容器的体积/ml 在121℃灭菌所需最少时间/min20-501575-15020250-50025100030 到达保压时间后，即可切断电源，在压力到0.5mpa，可缓慢放出蒸汽，应注意不要使压力降低太快，以致引起激烈的减压沸腾，使容器中的液体四溢。当压力降到零后，才能开盖，取出培养基，摆在平台上，以待冷凝。

不可久不放气，引起培养基成分变化，以至培养基无法摆斜面。一旦放置过久，由于锅炉内有负压，盖子打不开，只要将放气阀打开，大气压入，内外压力平衡，盖子便易打开了。

对高压灭菌后不变质的物品，如无菌水、栽培介质、接种工具，可以延长灭菌时间或提高压力。而培养基要严格遵守保压时间，既要保压彻底，又要防止培养基中的成分变质或效力降低，不能随意延长时间。

对于一些布制品，如实验衣、口罩等也可用高压灭菌。洗净晾干后用耐高压塑料袋装好，高压灭局20-30分钟。

高压灭菌前后的培养基，其ph值下降0.2-0.3单位。高压后培养基ph值的变化方向和幅度取决于多种因素。

培养基中成分单一时和培养基中含有高或较高浓度物质时，高压灭菌后的ph值变化幅度较大，甚至可大于2个ph值单位。环境ph值的变化大于0.5单位就有可能产生明显的生理影响。

高压灭菌通常会使培养基中的蔗糖水解为单糖，从而改变培养基的渗透压。在8%-20%蔗糖范围内，高压灭菌后的培养基约升高0.43倍。

培养基中的铁在高压灭菌时会催化蔗糖水解，可使15%-25%的蔗糖水解为葡萄糖和果糖。培养基值小于5.5，其水解量更多，培养基中添加0.1%活性炭时，高压下蔗糖水解大大增强，添加1%活性炭，蔗糖水解率可达5%。

为防止高压灭菌产生的上述一些变化可用下列方法：（1）经常注意搜集有关高压灭菌影响培养基成分的资料，以便及时采取有效措施。（2）设计培养基配方时尽量采用效果类似的稳定试剂并准确掌握剂量。

如避免使用果糖和山梨醇而用甘露醇，以IBA代替IAA，控制活性炭的用量（在0.1%以下）注意ph值对高压灭菌下培养基中成分的影响等。（3）配制培养基时应注意成分的适当分组与加入的顺序。

如将磷、钙和铁放在最后加入。（4）注意高压灭菌后培养基ph值的变化及恢复动态。

如高压灭菌后的ph值常由5.8升高至6.48。而96小时后又会降至5.8左右。

这样在实验中就可以根据这一规律加以掌握。2、用于无菌操作的器械采用灼烧灭菌 在无菌操作时，把镊子、剪刀、解剖刀等浸入95%的酒精中，使用之前取出在酒精灯火焰上灼烧灭菌。

冷却后，立即使用。操作中可采用250或500毫升的广口瓶，放入95%的酒精，以便插入工具。

3、玻璃器皿及耐热用具采用干热灭菌 干热灭菌是利用烘箱加热到160-180℃的温度来杀死微生物。由于在干热条件下，细菌的营养细胞的抗热性大为提高，接近芽孢的抗热水平，通常采用170℃持续90分钟来灭菌。

干热灭菌的物品要预先洗净并干燥，工具等要妥为包扎，以免灭菌后取用时重新污染。包扎可用耐高温的塑料。

灭菌时应渐进升温，达到预定温度后记录时间。烘箱内放置的物品的数量不宜过多，以免防碍热对流和穿透，到指定时间断电后，待充分冷凉，才能打开烘箱，以免因骤冷而使器皿破裂。

干热灭菌能源消耗太大，浪费时间。4、不耐热的物质采用过滤灭菌 一些生长调节剂，如赤霉素、玉米素、脱落酸和某些微生物是不耐热的，不能用高压灭菌处理，通常采用过滤灭菌方法。

一些化学成分在高温高压下会发生降解而失去效能或降低效能。经高温灭菌后赤霉素GA3的活性仅及不经高温灭菌的新鲜溶液的10%。

蔗糖经高温后部分被降解成d-葡萄糖和d-果糖，果糖又可被部分水解，产生抑制培养的植物组织生长的物质。高温还可使碳水化合物和氨基酸发生反应。

维生素具有不同程度的热稳定性，但如果培养基的ph值高于5.5,。

5.杀菌剂的注意事项有哪些

杀菌剂一般农药使用说明书都有推荐使用浓度，可以按说明使用，但最好还是根据当地植保技术部门在药效试验基础上提出的使用浓度进行施用。

干旱或炎热的夏天应当降低使用浓度，避免产生药害。其次，使用杀菌剂时还要注意使用时期和使用次数，掌握好喷药时期的关键是掌握病害发生和发展的规律，做好病害发生的预测预报工作，或根据当地植保部门对作物病害的预测预报做好喷施杀菌剂的准备。

一般情况下杀菌剂的喷洒都是在病害发生的初期进行，如稻瘟病等，尤其在高温天气，稻瘟病发展快，应立即喷药。而花生叶斑病害发展比较慢，刚发病时不要轻易喷药，更不能在发病前喷药，而是在发病后形成一定的发展趋势时开始喷药。

气候条件有利于病害迅速发展时要立即着手喷药，有时为了控制病情不得不在下毛毛雨时候也喷药。 喷药时期决定于病害发展规律外，还要考虑到作物的生育期，很多病害的发生都是与作物的某一生育阶段相联系。

此外，还要注意作物各生育期对杀菌剂的耐受力，防止产生药害。植物病害的发生和发展往往要一段时间，喷洒杀菌剂也很难一次解决问题，往往需要喷洒多次。

喷洒次数的多少主要决定于病菌再侵染情况，杀菌剂的残效期以及气候条件、光照、温度和降雨等。种苗消毒。

浸种要用乳浊液和溶液，不能用悬浮液，即可湿性粉剂不能用来浸种。浸种的关键是药液浓度和浸种时间，操作不当会造成灭菌效果差或造成药害。

其它因素如温度、种子类型、病菌所在部位等也影响浸种效果。 一般情况下，在种子类型、气温、药剂种类确定后，药剂浓度和浸种时间是可以协调的，浓度高可适当延长浸种时间。

病菌所在部位较深或种皮坚硬可适当延长浸种时间，气温高可适当缩短浸种时间。拌种时要求种子和药粉都必须是干燥的，否则会造成拌种不均匀，产生药害，影响种子的发芽率。

药粉用量一般占种子重量的0。2%~0。

5%，拌种时药剂和种子都要分成3~4批加入，然后适当旋转拌种容器使之拌和均匀。内吸性杀菌剂出现以后，又出现了一种新的拌种方法--湿拌法。

即把药粉用少量的水弄湿，然后拌种，或把干的药粉拌在湿的种子上，使药粉粘在种子表面，待播种之后，药剂慢慢溶解并吸收到植物体内向上传导。 棉花枯萎病、黄瓜枯萎病等土传病害，除了可以用浸种或拌种法防治外，还可以采用土壤消毒法防治。

土壤消毒首先要根据病害种类选择适当的杀菌剂，再根据药剂理化性质与土壤结构和性质选择适当的土壤处理方法。浇灌法适合于水溶性杀菌剂，将药剂调整到适当浓度以后，于每平方米地面上浇灌5~10千克左右的药液，土壤较干燥时可以采用较低浓度的药液，适当增加浇灌体积；土壤潮湿时可以采用高浓度小体积浇灌法。

蒸气压较高的杀菌剂可以采用犁底或犁沟施药，即将药粉或药液均匀撒入第一犁的沟底，用第二犁翻上的土将药剂盖住，此法不适合过于粘重的土壤，还可以将药粉或药液施在土壤表面后，随即翻土将药剂埋入土壤中。