细胞室使用(细胞疗法标本采集注意事项)

1.细胞疗法标本采集注意事项有哪些?

(1) 采集标本前，先认真核对，准备好专用的无菌容器和酒精灯等；检查容器有无裂缝、瓶塞有无松动、培养基是否足够、培养液有无浑浊和变质等；填写瓶签，在无菌容器外面贴上瓶签，标明科室、床号、姓名、性别、住院号或ID号、治疗目的 （细胞类别）、抽血量、送检日期和时间等。

（2） 采集标本前、中、后及制备操作前均应仔细“三查八对”，逐项核查，以免发生差错，并向患者说明抽血的相关注意事项及回输的时间，以消除顾虑，取得患者及其家属配合。 （3） 采集的标本，均须及时放入无菌容器内，禁止左右、上下摇动和振动，只需用双手心轻轻揉搓即可；采集标本时应严格执行无菌操作，不可混入防腐剂、消毒剂及其他药物，以免影响细胞制备的结果；封盖前用酒精灯常规灭菌瓶盖和瓶口加盖固封。

对疑有菌血症、败血症等的患者，不应作为细胞供体。 （4） 釆集各种标本均应按照操作规程进行，做到及时采集， 标本新鲜，量准确，注意及时送往细胞培养室，不应放置过久， 以免影响细胞制备的效能，特殊标本要有特殊注明。

2.分子生物学体外细胞培养具体操作过程和注意事项

一、准备工作 准备工作对开展细胞培养异常重要，工作量也较大，应给予足够的重视，推备工作中某一环节的疏忽可导致实验失败或无法进行。准备工作的内容包括器皿的清洗、干燥与消毒，培养基与其他试剂的配制、分装及灭菌，无菌室或超净台的清洁与消毒，培养箱及其他仪器的检查与调试。

二、取材 在无菌环境下从机体取出某种组织细胞（视实验目的而定），经过一定的处理（如消化分散细胞、分离等）后接入培养器血中，这一过程称为取材。如是细胞株的扩大培养则无取材这一过程。机体取出的组织细胞的首次培养称为原代培养。

理论上讲各种动物和人体内的所有组织都可以用于培养，实际上幼体组织（尤其是胚胎组织）比成年个体的组织容易培养，分化程度低的组织比分化高的容易培养，肿瘤组织比正常组织容易培养。取材后应立即处理，尽快培养，因故不能马上培养时，可将组织块切成黄豆般大的小块，置4℃的培养液中保存。取组织时应严格保持无菌，同时也要避免接触其他的有害物质。取病理组织和皮肤及消化道上皮细胞时容易带菌，为减少污染可用抗菌素处理。

三、培养 将取得的组织细胞接入培养瓶或培养板中的过程称为培养。如系组织块培养，则直接将组织块接入培养器皿底部，几个小时后组织块可贴牢在底部，再加入培养基。如系细胞培养，一般应在接入培养器皿之前进行细胞计数，按要求以一定的量（以每毫升细胞数表示）接入培养器皿并直接加入培养基。细胞进入培养器皿后，立即放入培养箱中，使细胞尽早进入生长状态。

正在培养中的细胞应每隔一定时间观察一次，观察的内容包括细胞是否生长良好，形态是否正常，有无污染，培养基的PH是否太酸或太碱（由酚红指示剂指示），此外对培养温度和CO2浓度也要定时检查。

原代培养一般有一段潜伏期（数小时到数十天不等），在潜伏期细胞一般不分裂，但可贴壁和游走。过了潜伏期后细胞进入旺盛的分裂生长期。细胞长满瓶底后要进行传代培养，将一瓶中的细胞消化悬浮后分至两到三瓶继续培养。每传代一次称为“一代”。二倍体细胞一般只能传几十代，而转化细胞系或细胞株则可无限地传代下去。转化细胞可能具有恶性性质，也可能仅有不死性（Immortality）而无恶性。

四、冻存及复苏 为了保存细胞，特别是不易获得的突变型细胞或细胞株，要将细胞冻存。冻存的温度一般用液氮的温度-196℃，将细胞收集至冻存管中加入含保护剂（一般为二甲亚砜或甘油）的培养基，以一定的冷却速度冻存，最终保存于液氮中。在极低的温度下，细胞保存的时间几乎是无限的。复苏一般采用快融方法，即从液氮中取出冻存管后，立即放入37℃水中，使之在一分钟内迅速融解。然后将细胞转入培养器皿中进行培养。

冻存过程中保护剂的选用、细胞密度、降温速度及复苏时温度、融化速度等都对细胞活力有影响。

五、常用仪器设备 无菌室，超净工作台，三重纯水蒸馏器，抽气泵，压力蒸气消毒器，电热恒温培养箱，培养器具，CO2培养箱，恒温水浴锅，倒置显微镜，离心机，无菌过滤器，洗刷装置，细胞计数板和电子细胞技术仪等等。

3.观察植物细胞时显微镜使用注意事项

1.右手握住镜臂，左手托住镜座。

2.把显微镜放在实验台上，略偏左（显微镜放在距实验台边缘7厘米左右处）。安装好目镜和物镜。

二、对光 3.转动转换器，使低倍物镜对准通光孔（物镜的前端与载物台要保持2厘 米的距离）。 4.把一个较大的光圈对准通光孔。

左眼注视目镜内（右眼睁开，同时画图）。转动反光镜，使光线通过通光孔反射到镜筒内。

通过目镜，可以看到白亮的视野。 三、观察 5.把所要观察的玻片标本（也可以用印有“6”字的薄纸片制成）放在载物台上，用压片夹压住，标本要正对通光孔的中心。

6.转动粗准焦螺旋，使镜筒缓缓下降，直到物镜接近玻片标本为止（眼睛看着物镜，以免物镜碰到玻片标本）。 7.左眼向目镜内看，同时反方向转动粗准焦螺旋，使镜筒缓缓上升，直到看清物像为止。

再略微转动细准焦螺旋，使看到的物像更加清晰。 注意事项：实验完毕，把显微镜的外表擦拭干净。

转动转换器，把两个物镜偏到两旁，并将镜筒缓缓下降到最低处。最后把显微镜放进镜箱里，送回原处。

其实书上挺详细的，看看书吧，也许对你会有帮助。