小鼠摘除眼球采血及分离血清
一.器材
离心管,弯头镊子,离心机,移液器
二.步骤
1. 摘除眼球采血
(1)左手拇、食指抓取小鼠双耳及颈后皮肤,小指固定尾部;
(2)中指将小鼠左侧前肢轻压在胸骨心脏部位,无名指按在腹部,捻动拇指,轻压取血侧眼部皮肤,使眼球充血突出;
(3)用弯头镊夹取眼球;
(4)根据需要捻动拇指与食指的方向,使血液从眼眶内以不同速度垂直流入离心管;
(5)同时用左手中指轻按小鼠心脏部位,以加快心脏泵血速度;
(6)当血液流尽时,用脱臼法处死小鼠。
2. 分离血清
(1)将离心管中的血置37℃温箱或水浴1小时,也可室温2小时;
(2)再置4℃冰箱内3~4小时或过夜;
(3)待血液凝固血块收缩后,4000rpm离心10分钟;
(4)取上清于干净的离心管中,保存于-20℃,或加入防腐剂(0.01%硫柳汞或0.02%叠氮钠),置4℃冰箱中保存备用。
三.注意:
1. 采血前,可给小鼠喂点水;
2. 摘眼球采血取血量能达0.8~1.2ml,但老年和疾病小鼠血量会降低;
3. 采血场所有充足的光线;室温夏季保持在25~28℃,冬季,15~20℃为宜;
4. 防止血液浸入眼部周围毛发,否则会造成污染和溶血;
5. 按压心脏时,用力一定要适度,若用力过度,一是会造成动物采血中途死亡,使采血不完全,二是有可能引起溶血现象发生,影响实验结果;
6. 采血用的器材和试管必须保持清洁干燥;
7. 采血时要防止小鼠挣扎,否则会损失比较多的血样;
8. 血液凝固后不宜在4℃放置过久,否则会溶血。
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1.大鼠麻醉问题;
我们将一浸过乙醚的棉球放在一小盘里,然后放在大鼠附近,再找个能罩住老鼠和盘子的大烧杯样的东西,留个口罩住老鼠。等他醉了就可实施手术了。要是中途有醒,直接握住大鼠,将其鼻子塞进乙醚的瓶子里。观察其麻醉状态。不易过深,要不就死掉了。血都会变成黑色的,还粘稠。手段有些暴力,爱护动物的筒子们不要责怪。
2.取血工具:
我们用的是化学上用来测熔点的毛细管,有一定硬度。用肝素钠注射液润洗过的,掰成几段,太短了手抓着不合适,太长了容易凝血。
3.手术手法:
在大鼠一侧的眼内侧眼球和内测眼睑与头平面呈60度左右的夹角,温柔的用力,就可见血源了。不要捅的太深,捅到骨头上,也不会出血。太浅老鼠受罪也取不出血来。要注意剪断老鼠的胡须,以防干扰或溶血。我都是两侧眼后轮流取的。
还有一个技术关键就是血流变慢的时候,要用握大鼠的食指和拇指向脑后静脉方向用力按压。或者一开始的时候就要握紧。
剩下的就是收集血液,我们当时是两个人帮忙完成的,一个人够呛。余下的都不是什么技术关键,不说了。
这个实验我做过。
所有的材料要先清洗并灭菌。
1.用镊子直接将眼球摘除(这个是需要技巧的,有时候摘的不好,血会很少,最好先练习下)
2.摘除眼球后血就会直接流出来,这个时候用EP管,口挨着眼睛那里就可以接了,当时我用的1.5ml的EP管就差不多够用了。根据你小鼠的大小,可以提前先试一下大概能接多少。
3.接完后将EP管放在架子上放进4度凝固一会儿就可以离心了
4.离心后用移液枪取上清测定。
PS:抓老鼠要注意哦,小心被抓伤、咬伤。
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