folin测定可溶性蛋白质(Folin酚法（Lowry）测定蛋白质的分子量应的注意事项)

1.Folin酚法（Lowry）测定蛋白质的分子量应的注意事项

仪器有分光光度计 台式离心机 精密天平 三角瓶 烧杯 量筒 移液器 Folin—酚试剂法最早由Lowry确定了蛋白质浓度测定的基本步骤。

以后在生物化学领域得到广泛的应用。这种蛋白质测定法是最灵敏的方法之一。

过去此法是应用最广泛的一种方法，由于其试剂乙的配制较为困难（现在已可以订购），近年来逐渐被考马斯亮兰法所取代。此法的显色原理与双缩脲法是相同的，只是加入了第二种试剂，即Folin—酚试剂，以增加显色量，从而提高了检测蛋白质的灵敏度。

这两种显色反应产生深蓝色的原因是：在碱性条件下，蛋白质中的肽键与铜结合生成复合物。 Folin—酚试剂中的磷钼酸盐—磷钨酸盐被蛋白质中的酪氨酸和苯丙氨酸残基还原，产生深蓝色（钼兰和钨兰的混合物）。

在一定的条件下，蓝色深度与蛋白的量成正比。

2.Folin

Folin-酚法蛋白定量包括两步反应：第一步生成蛋白质一铜络合物； 第二步是酚基将磷钥酸、磷钨酸试剂还原. 试剂甲由A(4%碳酸钠溶液与0.2mol/L氢氧化钠溶液等体积混合)和B(1%硫酸铜溶液与2%的酒石酸钾钠溶液等体积混合)

两种溶液组成.你说的加了甲后10min再加乙，因为第一步反应肯定要时间的，

试剂甲当然不能省了，其他的不说，它最起码提供了碱性的反应条件，

Folin-酚法测定蛋白酶活力的原理是蛋白酶水解酪蛋白产生Tyr， 在碱性条件下，Tyr与Folin试剂反应生产蓝色物质，于680nm比色测定光吸收值，计算酶活力。要绘制 Tyr标准曲线，

这两个共同的步骤是第二步显色反应.