1.干热灭菌法
1.1灼烧与火焰灭菌:灼烧主要是用于接种工具灭菌,在火焰上灼烧即可达到彻底灭菌,火焰灭菌通常用于无菌操作中,将试管口、玻璃瓶口、硅氟塑料塞等反复通过火焰数次,利用火焰对管口等进行灭菌,阻止管口污染,作为无菌操作过程中的辅助灭菌手段。
1.2干烤灭菌:利用热辐射及干热空气进行灭菌。一般将待检灭菌的物品如金属、玻璃、陶瓷制品包装后,均可在烤箱内干热灭菌。通常加热至160℃,保温2h可完全灭菌。但不宜超过170℃,玻璃量具易变形。降温过速,骤冷易引起玻璃器皿炸裂。干热灭菌时装入干烤箱内的物品切勿紧密,应有空隙,利于热空气流动,过密,致使温度不均,部分物品灭菌不彻底。
2.湿热灭菌法
通过加压提高蒸汽温度,用高压蒸汽灭菌,穿透力强,温度高,灭菌效果最好。
注意事项:1.完全排除高压灭菌器内的冷空气。有冷空气存在时,在同一表压下所达到的温度值要低,而冷空气排出越少,温度就低得越多。在高压蒸汽灭菌时,为保证达到规定的温度,必须将冷空气完全排除。否则,虽然压力达到,而温度达不到规定的要求,灭菌就不彻底。
3.紫外线 杀菌谱广,但穿透力弱,影响因素多,杀菌效能受到一定限制。
紫外线消毒效果与紫外线强度、照射时间、温度与湿度等因素有关。
我国规定紫外灯照射强度距离1m处不低于70μw/cm2。一般紫外灯使用超过100h,则应更换。表面有尘土,降低灭菌效果。紫外灯杀菌的温度以20~40℃,相对湿度40%~60%为宜。
热力灭菌利用高温杀死微生物的方法,称为热力灭菌。
当高温作用于微生物细胞时,首先引起生物细胞内原生质胶体的变性,酶结构的破坏,从而使细胞失去了生活功能上的协调,停止生长发育,随着高温的继续作用,细胞内原生质便发生凝固,酶结构完全破坏,活性消失,生化反应停止。 渗透交换等新陈代谢活动消失,细胞立即死亡,这就是高温灭菌的基本原理。
不同微生物对高温的抵抗力不同。根据微生物生长繁殖与温度的关系,可把它们分为3大类群:高温性、中温性和低温性。
中温性微生物耐高温的能力不及高温性微生物,但大于低温性微生物,同一种微生物的不同生理状态对高温的忍耐力也大不相同。 处于营养生长期的微生物细胞,耐热性差,因为该细胞内各种酶系活跃,新陈代谢旺盛,细胞内自由水含量多,受热后胶体容易变性凝固,大部分真菌、酵母和细菌的营养体,在60°C水中加热几分钟即死亡;但处于休眠体的微生物细胞,耐热性却很强,真菌的孢子或细菌的芽孢,因为它们酶系活动几乎停止,新陈代谢处在极低水平,细胞内自由水含量少,结合水含量多,受热后芽孢蛋白质不易发生变性,大多数芽孢杆菌和梭菌的芽孢,在沸水中煮数分钟或数小时,还能存活。
热力灭菌经常使用两个杀菌指数:热死温度和热死速度。前者指在10分钟内可以杀死细菌悬液中所有细胞的温度,后者指在一定温度下,杀死所有细胞所需的时间。
在同样温度条件下,热死温度高的微生物,其热死速度慢,热死温度低的微生物,其热死速度快。提高灭菌温度,可以加快热死速度。
因此,可以通过提高灭菌温度来缩短灭菌时间,或延长灭菌时间以降低灭菌温度。热力灭菌经济有效,简便易行,是最普遍采用的方法。
它可以分为湿热灭菌和干热灭菌两种。
(1)喷洒消毒将消毒药用水稀释成合适的浓度来喷洒消毒,主要用于畜禽舍、笼具、饲养场地、运输工具及排泄物,周边环境的消毒。
(2)熏蒸消毒一般用甲醛和高锰酸钾混合后发生反应,产生的气体具有强烈的刺激性气味来达到消毒的目的,多用于密封舍的消毒和种蛋消毒。熏蒸消毒必须有较高的室温和相对湿度,室温不低于15℃,相对湿度为60%~80%,消毒时间为8~10小时。
(3)饮水消毒将消毒剂稀释到合适的浓度,即将消毒药加入一定量的水中,让畜禽自由饮用,来消除肠道病菌。(4)浸泡消毒用于浸泡用具、器械的消毒。
1.干热灭菌法1.1灼烧与火焰灭菌:灼烧主要是用于接种工具灭菌,在火焰上灼烧即可达到彻底灭菌,火焰灭菌通常用于无菌操作中,将试管口、玻璃瓶口、硅氟塑料塞等反复通过火焰数次,利用火焰对管口等进行灭菌,阻止管口污染,作为无菌操作过程中的辅助灭菌手段。
1.2干烤灭菌:利用热辐射及干热空气进行灭菌。一般将待检灭菌的物品如金属、玻璃、陶瓷制品包装后,均可在烤箱内干热灭菌。
通常加热至160℃,保温2h可完全灭菌。但不宜超过170℃,玻璃量具易变形。
降温过速,骤冷易引起玻璃器皿炸裂。干热灭菌时装入干烤箱内的物品切勿紧密,应有空隙,利于热空气流动,过密,致使温度不均,部分物品灭菌不彻底。
2.湿热灭菌法通过加压提高蒸汽温度,用高压蒸汽灭菌,穿透力强,温度高,灭菌效果最好。注意事项:1.完全排除高压灭菌器内的冷空气。
有冷空气存在时,在同一表压下所达到的温度值要低,而冷空气排出越少,温度就低得越多。在高压蒸汽灭菌时,为保证达到规定的温度,必须将冷空气完全排除。
否则,虽然压力达到,而温度达不到规定的要求,灭菌就不彻底。3.紫外线 杀菌谱广,但穿透力弱,影响因素多,杀菌效能受到一定限制。
紫外线消毒效果与紫外线强度、照射时间、温度与湿度等因素有关。我国规定紫外灯照射强度距离1m处不低于70μw/cm2。
一般紫外灯使用超过100h,则应更换。表面有尘土,降低灭菌效果。
紫外灯杀菌的温度以20~40℃,相对湿度40%~60%为宜。
消毒 具有杀死致病微生物的作用或方法,称为消毒。
灭菌 指彻底杀菌,即用物理或化学等方法,杀死物体上的一切微生物,以及它们的芽胞和孢子,使物体成为无菌状态。常用消毒和灭菌方法 (一)物理灭菌方法 通过高潮、射线、微波以及器械进行灭菌或除菌的方法均为物理灭菌方法。
1、热力灭菌 利用高潮杀死微生物的方法,称为热力灭菌。热力灭菌经常使用两个杀菌指数:热死温度和热死速度。
热力灭菌经济有效,简便易行,是最普遍采用的方法,它可以分为湿热灭菌和干热灭菌两种。(1)湿热灭菌 指利用热蒸汽杀死微生物。
常用湿热灭菌方法圾如下几种。A.高压蒸汽灭菌法 利用高温高压蒸汽进行灭菌的方法。
高压蒸汽灭菌可以杀死一切微生物,包括细菌的芽孢,真菌的孢子或休眠体等耐高温的个体。灭菌的蒸汽温度随蒸汽压力增加而升高,增加蒸汽压力,灭菌的时间可以大大缩短。
因此它是一种最有效的、使用最广泛的灭菌方法。使用高压蒸汽灭菌时,应注意以下几点: a、灭菌锅内的冷气必须排尽。
b、灭菌锅内的培养基必须排列疏松,使蒸汽畅通。 c、灭菌完毕,应缓慢减压。
d、注意棉塞防湿。B.常压蒸汽灭菌法 采用自然压力的蒸汽进行灭菌的方法。
利用常压蒸汽灭菌时,灭菌物品在灭菌锅内排列不能过密,要保证蒸汽能在锅内均匀地流通。流通蒸汽的温度一般为100℃左右,要杀死耐热性的芽胞, 必须延长灭菌时间,一般为6-8小时。
这种专用流通蒸汽灭菌灶的最大优点是:容量大, 结构简单,成本低廉,可自行建造。缺点是灭菌时间长,能源消耗量大,稍不注意就有灭菌不彻底的现象发生。
C.间歇灭菌法 指间歇一定时间,连续消毒几次达到灭菌的方法。此方法运用于不耐高温的(100℃左右)培养基的灭菌。
欲杀死培养基的芽胞, 可将其在流通蒸汽中消毒20-30分钟,先杀死其中的营养体细胞,然后将培养基在室温或温箱中培养,使芽孢发芽长成营养体,再用流通蒸汽消毒20-30分钟,杀死新长成的营养体细胞,这样连续3次,即可杀死培养基中的全部芽孢,达到无菌状态。(2)干热灭菌 采用灼烧或干热空气灭菌,称为干热灭菌。
干热灭菌主要有两种类型。A.火焰灭菌法 即通过火焰高温灼烧进行灭菌的方法。
B.干热灭菌法 即利用加热的高温空气进行灭菌的方法。2、辐射灭菌 利用辐射产生的能量进行杀菌的方法,称之辐射灭菌。
生产上应用辐射灭菌方法主要是指此外线灭菌。3、过滤除菌 是利用机械的阻留方法来除去介质中的微生物。
(二)化学灭菌方法 利用化学药品灭菌或创造一个无菌环境,也是非常重要的灭菌手段。许多公演药品可使菌体蛋白质变性,有的可阻碍微生物的某一代谢环节。
因此,化学药品可超到杀菌作用或抑菌作用。直接加入培养基能起灭菌作用,又不影响培养基成分的化学药品并不多,根据报道β-丙烷内酯(BPL)和焦碳酸二乙酯(PKE)具有这种作用,但应用甚少。
有的具有杀菌和抑菌作用,但加入培养基后阻碍了香菇菌丝体生长发育,也不能被采用。香菇生产中常用的化学药品及具体使用方法如下。
1、甲醛的杀菌机理是具有强还原作用。 2、硫磺及其熏蒸灭菌方法 3、乙醇类 乙醇又称为酒精。
70-80%乙醇的杀菌能力较强。 4、酚及其衍生物 常用的是石碳酸,又名苯酚,纯品为无色或白色针状、块状或三棱形晶体,溶于水,具特殊气味。
浓石碳酸能使皮肤变白、手指麻痹并可损坏皮肤与粘膜,对人畜有毒。0.5-1%的石碳酸水溶液作为喷雾剂处理无菌室(箱), 能起到降尘除菌、空气消毒的作用;也可用3-5%的石碳酸水溶液对器械浸泡消毒。
在5%石碳酸水溶液中若加入0.85-0.9%的食盐则可增加石碳酸药效,如有乙醇存在时, 则药效大减。 5、石灰与碱类 石灰分为生石灰(CaO)与熟石灰(Ca(OH)2)两种。
起杀菌作用的是熟石灰中的氢氧根离子,能水解蛋白质和核酸,使微生物的酶系和结构受到损害,并能分解菌体中的糖类。 6、氧化剂与还原剂 高锰酸钾、过氧化氢、卤素(氯、溴、碘)及某些化合物(或络合物),如漂白粉等均为氧化剂,可以杀菌。
亚硫酸及亚硫酸盐等均为还原剂,能通过氧化还原反应起到杀菌作用。 7、重金属类 一些重金属及其化合物,可使微生物的蛋白合成受破坏,亦可导致酶失活及取代细胞结构上的主要元素,使微生物生长受掏或导致死亡。
8、表面活性剂 具有降低表面张力的物质称为表面活性剂。常用的肥皂与十二烷基磺酸钠类(如洗衣粉)的杀菌能力相当于石碳酸的2-3倍。
9、气雾消毒盒。
常用的消毒灭菌方法有两大类:物理消毒灭菌法和化学消毒灭菌法。
物理消毒灭菌法是利用物理因素如热力、辐射、过滤等清除或杀灭病原微生物的方法;化学消毒灭菌法是各种化学消毒剂来清除或杀灭病原微生物的方法。不能用物理^法消毒的可选用化学方法,包括高效、中效、低效消毒剂或灭菌剂。
其中物理消毒灭菌法包括如下内容: (1) 热力消毒灭菌法:①干热法,包括燃烧法、干烤法;②湿热法,包括压力蒸汽灭菌法、煮沸消毒法等; (2) 辐射消毒法:①日光暴晒法;②紫外线消毒法;③臭氧消毒法; (3) 电离辐射灭菌法; (4) 微波消毒法; (5) 机械除菌法。
灭菌是指采用强烈的理化因素使任何物体内外部的一切微生物永远丧失其生长繁殖能力的措施。
灭菌常用的方法有化学试剂灭菌、射线灭菌、干热灭菌、湿热灭菌和过滤除菌等。灭菌的彻底程度受灭菌时间与灭菌剂强度的制约。
微生物对灭菌剂的抵抗力取决于原始存在的群体密度、菌种或环境赋予菌种的抵抗力。灭菌是获得纯培养的必要条件,也是食品工业和医药领域中必需的技术。
方法的选择 根据物品污染后导致感染的风险高低选择相应的消毒或灭菌方法: 1)高危险度物品,应采用灭菌的方法处理; 2)中危险度物品,应采用达到中水平消毒以上效果的消毒方法; 3)低危险度物品,宜采用低水平消毒方法,或做清洁处理;遇有病原微生物污染时,针对所污染的病原微生物种类选择有效的消毒方法 根据物品上污染微生物的种类、数量选择消毒或灭菌的方法: 1) 对收到致病菌芽孢、真菌孢子、分枝杆菌和经学传播病原体污染的物品,应采用高水平消毒或灭菌; 2)对受到真菌、亲水病毒、螺旋体、支原体、衣原体等病原微生物污染的物品,应采取中水平以上的消毒方法; 3)对受到一般细菌和亲脂病毒等污染的物品,应采用达到中水平或低水平的消毒方法。
1、重复使用的诊疗器械、器具和物晶أ使用后应先清洁。再进行消毒或灭菌。
2 、被朊病毒、气性坏疽及突发不明原因的传染病病原体污染的诊疗器械、器具和物品أ应执行本规范第ll章的规定。
3 耐热、耐湿的手术器械أ应酋选压力蒸汽灭菌أ不应采用化学消毒剂浸泡灭菌。
4 、环境与物体表面一般情况下先清洁。再消毒أ当受到患者的血液、体液等污染时أ先去除污染物أ再清洁与消毒。
5 、医疗机构消毒工作中使用的消毒产品应经卫生行政部门批准或符合相应标准技术规范أ并应遵循批准使用的范围、方法和注意事项。
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