trizol提rna(想请教用过Trizol法提取RNA,且结果比较理想的详细步骤及注意事项)
1.想请教用过Trizol法提取RNA,且结果比较理想的详细步骤及注意事项
我这边刚好在做，给你说下：
贴壁细胞的话去培养液，PBS洗一遍，加Trizol吹打下来。组织的话，在液氮里面捣碎，然后粉末放进Trizol，用超声粉碎器粉碎（超声每3秒，停10秒冷却，直到看不见组织碎末）。
（此步骤可以-80oC冻存，下面可以以后再做）
每1毫升Trizol加200微升氯仿（氯仿需饱和，可以在氯仿加一两公分高的水层，摇晃后静置分层，用时到下层取氯仿）
使出吃奶的劲把Trizol氯仿混合液摇成浑浊的乳液，每个样起码狂摇30秒（用手拿着，不能用漩涡混匀器）
静置3分钟，分层，进4度离心机，14000转15-30分钟。
取上层无色清澈液体，进新管。枪尖绝对不能贴壁，绝对不能碰触到极薄的乳白固态中间层，绝对不能吸到下层的红色液体。假定是1毫升Trizol200微升氯仿的量，你这里取个400-500微升就可以偷笑了，千万别贪心，造成污染。
加相等体积异丙醇，倒置数次混匀，不用太激烈。
（次步骤又可以-80oC冻存，下面可以以后再做）
进4度离心机，14000转10分钟，这个时候可以看见小沉淀物了，白色，看不见的话，产量就悲剧了。
弃上清，用1毫升75%酒精洗两次（加酒精，手摇看到沉淀物游来游去就可以了，然后离心弃上清）酒精尽量吸干净，但枪尖不要碰到沉淀物。
盖子打开，在通风橱里面晾干（一般5-10分钟。看到沉淀物从白色变半透明就赶快停了，干过头了等下难以溶解）
加干净的水（没有核酸酶的，你懂的）10-50微升依你产量而定啦。55oC水浴5-10分钟充分溶解。
大功告成，可以测浓度和各项指标，分装，冻存了。
如果需要用DNAse去DNA，加在异丙醇步骤前即可。
2.Trizol法提取RNA操作步骤
动植物总RNA提取-Trizol法 Trizol法适用于人类、动物、植物、微生物的组织或培养细菌，样品量从几十毫克至几克。
用Trizol法提取的总RNA绝无蛋白和DNA污染。RNA可直接用于Northern斑点分析，斑点杂交， Poly(A)+分离，体外翻译，RNase封阻分析和分子克隆。
1、将组织在液N中磨成粉末后，再以50-100mg组织加入1ml Trizol液研磨，注意样品总体积不能超过所用Trizol体积的10%。 2、研磨液室温放置5分钟，然后以每1mlTrizol液加入0。
2ml的比例加入氯仿，盖紧离心管，用手剧烈摇荡离心管15秒。 3、取上层水相于一新的离心管，按每mlTrizol液加0。
5ml异丙醇的比例加入异丙醇，室温放置10分钟，12000g离心10分钟。 4、弃去上清液，按每ml Trizol液加入至少1ml的比例加入75%乙醇，涡旋混匀，4℃下7500g离心5分钟。
5、小心弃去上清液，然后室温或真空干燥5-10分钟，注意不要干燥过分，否则会降低RNA的溶解度。然后将RNA溶于水中，必要时可55℃-60℃水溶 10分钟。
RNA可进行mRNA分离，或贮存于70%乙醇并保存于-70℃。 [注意] 1、整个操作要带口罩及一次性手套，并尽可能在低温下操作。
2、加氯仿前的匀浆液可在-70℃保存一个月以上，RNA沉淀在70%乙醇中可在4℃保存一周，-20℃保存一年。 。
3.用trizol法提取RNA的方法及每一步的原理.
实验步骤：1. 提取组织RNA时，每50~100mg组织用1ml Trizol试剂对组织进行裂解：提取细胞RNA时，先离心沉淀细胞，每5~106个细胞加1ml Trizol后，反复用枪吹打或剧烈震荡以裂解细胞；2. 将上述组织或细胞的Trizol裂解液转入EP管中，在试问15~30℃下放置5分钟；3. 在上述EP管中，按照每1mlTrizol后加0.2ml氯仿的量加入氯仿，盖上EP管盖子，在手中用力震荡15秒，在室温下（15~30℃）放置2~3分钟后，12000g(2~8℃)离心15分钟；4. 去上层水相置于新EP管中，按照每1mlTrizol加0.5ml异丙醇的量加入异丙醇，在室温下（15~30℃）放置10分钟后，12000g(2~8℃)离心10分钟；5. 弃上清，按照每1ml Trizol加1ml75% 乙醇进行洗涤，涡旋混合，7500g(2~8℃)离心5分钟，弃上清；6. 让沉淀的RNA在室温在自然干燥；7. 用Rnase-free water 溶解RNA沉淀各试剂的作用：1、TRIZOL主要成分是苯酚。
苯酚的主要作用是裂解细胞，使细胞中的蛋白，核酸物质解聚得到释放。苯酚虽可有效地变性蛋白质，但不能完全抑制RNA酶活性，因此TRIzol中还加入了8-羟基喹啉、异硫氰酸胍、β-巯基乙醇等来抑制内源和外源RNase(RNA酶)。
TRIZOL是从细胞和组织中提取总RNA的即用型试剂，在样品裂解或匀浆过程中，TRIZOL能保持RNA完整性。加入氯仿后，溶液分为水相和有机相，RNA在水相中。
取出水相，用异丙醇可沉淀回收RNA。※0.1%的8-羟基喹啉可以抑制RNase，与氯仿联合使用可增强抑制作用。
※异硫氰酸胍属于解偶剂，是一类强力的蛋白质变性剂，可溶解蛋白质并使蛋白质二级结构消失，导致细胞结构降解，核蛋白迅速与核酸分离。※β-巯基乙醇的主要作用是破坏RNase蛋白质中的二硫键。
2、氯仿为有机溶剂与水互不相溶，RNA（核糖核“酸”的盐型）是离子化合物，溶于水相3、异丙醇能与与任意比例的水混合，因此加入异丙醇，能够夺取RNA/DNA周围的水分，RNA/DNA能够聚集而发生沉淀。
