还原糖的测定方法 食物中还原糖的测定方法:高锰酸钾滴定法和直接滴定法。
一、高锰酸钾滴定法1.原理 样品经除去蛋白质后,其中还原糖在碱性环境下将铜盐还原为氧化亚铜,加硫酸铁后,氧化亚铜被氧化为铜盐,以高锰酸钾溶液滴定氧化作用后生成的亚铁盐,根据高锰酸钾消耗量计算氧化亚同含量,再查表得还原糖量。2.适用范围 GB5009.7-85,本法适用于所有食品中还原糖的测定以及通过酸水解或酶水解转化成还原糖的非还原性糖类物质的测定。
3.仪器 (1) 滴定管 (2) 25ml古氏坩埚或G4垂融坩埚 (3) 真空泵 (4) 水浴锅4.试剂 除特殊说明外,实验用水为蒸馏水,试剂为分析纯。4.1 6 mol/L盐酸:量取50ml盐酸加水稀释至100 ml。
4.2 甲基红指示剂:称取10mg甲基红,用100ml乙醇溶解。4.3 5 mol/L氢氧化钠溶液:称取20g氢氧化钠加水溶解并稀释至100ml。
4.4 碱性酒石酸铜甲液:称取34.639g硫酸铜(CuSO4·5H2O),加适量水溶解,加0.5ml硫酸,再加水稀释至500ml,用精制石棉过滤。4.5碱性酒石酸铜乙液:称取173g酒石酸钾钠与50g氢氧化钠,加适量水溶解,并稀释至500ml,用精制石棉过滤,贮存于橡胶塞玻璃瓶中。
4.6精制石棉:取石棉先用3mol/L盐酸浸泡2~3天,用水洗净,再加2.5mol/L氢氧化钠溶液浸泡2~3天,倾去溶液,再用热碱性酒石酸铜已液浸泡数小时,用水洗净。再以3mol/L盐酸浸泡数小时,以水洗至不呈酸性。
然后加水振摇,使成微细的浆状软县委,用水浸泡并贮存于玻璃瓶中,即可用做填充古氏坩埚用。4.7 0.1000mol/L高锰酸钾标准溶液。
4.8 1mol/L氢氧化钠溶液:称取4g 氢氧化钠,加水溶解并稀释至100ml。4.9 硫酸铁溶液:称取50g硫酸铁,加入200ml水溶解后,慢慢加入100ml硫酸,冷却后加水稀释至1L。
4.10 3mol/L盐酸:量取30ml盐酸,加水稀释至120ml。5. 操作方法5.1 样品处理:5.1.1 乳类、乳制品及含蛋白质的食品:称取约0.5~2 g固体样品(吸取2~10 ml液体样品),置于250 ml容量瓶中,加50ml水,摇匀。
加入10 ml碱性酒石酸铜甲液及4ml1mol/L氢氧化钠溶液,加水至刻度,混匀。静置30min,用干燥滤纸过滤,弃去初滤液,滤液备用。
(注:此步骤目的是沉淀蛋白)5.1.2 酒精性饮料:吸取100 ml样品,置于蒸发皿中,用1mol/L氢氧化钠溶液中和至中性,在水浴上蒸发至原体积1/4后(注:如果蒸发时间过长,应注意保持溶液pH为中性),移入250ml容量瓶中。加50 ml水,混匀。
以下按5.1.1自"加10ml碱性酒石酸铜甲液"起依法操作。5.1.3 含多量淀粉的食品:称取2~10 g样品,置于250 ml容量瓶中,加200 ml水,在45℃水浴中加热1h,并时时振摇。
(注意:此步骤是使还原糖溶于水中,切忌温度过高,因为淀粉在高温条件下可糊化、水解,影响检测结果。)冷却后加水至刻度,混匀,静置。
吸取200ml上清液于另一250 ml容量瓶中,以下按5.1.1自"加10ml碱性酒石酸铜甲液"起依法操作。5.1.4 含有脂肪的食品:称取2~10g样品,先用乙醚或石油醚淋洗3次,去除醚层。
加入50ml水混匀,以下按5.1.1自"加10ml碱性酒石酸铜甲液"起依法操作。5.1.5 汽水等含有二氧化碳的饮料:吸取100 ml样品置于蒸发皿中,在水浴上除去二氧化碳后,移入250ml容量瓶中,并用水洗涤蒸发皿,洗液并入容量瓶中,再加水至刻度,混匀后,备用。
5.2 样品测定:吸取50ml处理后的样品溶液,于400ml烧杯中,加入25ml碱性酒石酸铜甲液及25ml乙液,于烧杯上盖一表面皿,加热,控制在4min内沸腾,再准确煮沸2min,乘热用铺好石棉的古氏坩埚或G4垂融坩埚抽滤,并用60℃热水洗涤烧杯及沉淀,至洗液不成碱性为止。(注:还原糖与碱性酒石酸铜试剂的反应一定要在沸腾状态下进行,沸腾时间需严格控制。
煮沸的溶液应保持蓝色,如果蓝色消失,说明还原糖含量过高,应将样品溶液稀释后重做。)将古氏坩埚或垂融坩埚放回原400ml烧杯中,加25ml硫酸铁溶液及25ml水,用玻棒搅拌使氧化亚铜完全溶解,以0.1mol/L高锰酸钾标准液滴定至微红色为终点。
同时吸取50ml水,加与测样品时相同量的碱性酒石酸铜甲、乙液,硫酸铁溶液及水,按同一方法做试剂空白实验。6. 计算:X1=(V-V0)*N*71.54 (1) 式中: X1--样品中还原糖质量相当于氧化亚铜的质量,mg;V--测定用样品液消耗高锰酸钾标准液的体积,ml;V0--试剂空白消耗高锰酸钾标准液的体积,ml;N--高锰酸钾标准溶液的浓度;71.54--1ml 1mol/L高锰酸钾溶液相当于氧化亚铜的质量,mg。
根据(1)式中计算所得氧化亚铜质量,查附表"氧化亚铜质量相当于葡萄糖、果糖、乳糖、转化糖的质量表",再计算样品中还原糖含量。X2=(m1*V2)∕(m2*V1)*(100∕1000) (2) 式中: X2--样品中还原糖的含量,g/100g(g/100ml);m1--查表得还原糖质量,mg;m2--样品质量(或体积), g(ml);V1--测定用样品处理液的体积,ml;V2--样品处理后的总体积,ml。
7.举例:称取某食物样品3.00g,经过处理后用水定容至250ml。取50ml进行测定,消耗0.1003mol/L高锰酸钾标准液5.20ml,同时测试剂空白为0.36ml,则 样品中还原糖质量相当于氧化亚铜的质量为:X1(mg) =(5.20-0.36)*0.1003*71.54 = 。
糖的测定方法 一般有四种方法: 1、直接滴定法。
原理为 糖还原天蓝色的氢氧化铜为红色的氧化亚铜。缺点:水样中的还原性物质能对糖的测定造成影响。
2、高锰酸钾滴定法。所用原理同直接滴定法。
缺点:水样中的还原性物质能对糖的测定造成影响,过程较为复杂,误差大。3、硫酸苯酚法。
糖在浓硫酸作用下,脱水形成的糠醛和羟甲基糠醛能与苯酚缩合成一种橙红色化合物,在10-100mg范围内其颜色深浅与糖的含量成正比,且在485nm波长下有最大吸收峰,故可用比色法在此波长下测定。苯酚法可用于甲基化的糖、戊糖和多聚糖的测定,方法简单,灵敏度高,实验时基本不受蛋白质存在的影响,并且产生的颜色稳定160min以上。
缺点:如果水样呈橙红色(大部分水样为黄色),会对比色法造成较大的干扰。4、蒽酮法糖在浓硫酸作用下,可经脱水反应生成糠醛和羟甲基糠醛,生成的糠醛或羟甲基糠醛可与蒽酮反应生成蓝绿色糠醛衍生物,在一定范围内,颜色的深浅与糖的含量成正比,故可用于糖的测定。
缺点:,不同的糖类与蒽酮试剂的显色深度不同,果糖显色最深,葡萄糖次之,半乳糖、甘露糖较浅,五碳糖显色更浅。综合比较;采用蒽酮法能将最为准确地测定尾水中糖的含量。
(一) 直接滴定法Ⅰ、原理 v 一定量的碱性酒石酸铜甲、乙液等量混合,立即生成天蓝色的氢氧化铜沉淀,这种沉淀很快与酒石酸钠反应,生成深蓝色的可溶性酒石酸钾钠铜络合物。在加热条件下,以次甲基蓝作为指示剂,用标液滴定,样液中的还原糖与酒石酸钾钠铜反应,生成红色的氧化亚铜沉淀,待二价铜全部被还原后,稍过量的还原糖把次甲基蓝还原,溶液由蓝色变为无色,即为滴定终点。
根据样液消耗量可计算出还原糖含量。样品经除去蛋白质后,在加热条件下,以次甲基蓝做指示剂,滴定标定过的碱性酒石酸铜溶液(用还原糖标准溶液标定碱性酒石酸铜溶液),根据样品溶液消耗体积计算还原糖量。
Ⅱ、仪器和试剂 1.仪器 酸式滴定管,可调电炉(带石棉板),250ml容量瓶。 2.试剂1. 盐酸。
2. 碱性酒石酸铜甲液:称取15g硫酸铜(CuSO4·5H2O)及0.05g次甲基蓝,溶于水中并稀释至1000mL。3. 碱性酒石酸铜乙液:称取50g酒石酸钾钠与75g氢氧化钠,溶于水中,再加入4g亚铁氰化钾,完全溶解后,用水稀释至1000 ml,贮存于橡胶塞玻璃瓶内。
4. 乙酸锌溶液:称取21.9 g乙酸锌,加3ml冰乙酸,加水溶解并稀释至100ml。5. 亚铁氰化钾溶液:称取10.6g亚铁氰化钾,用水溶解并稀释至100ml。
6. 葡萄糖标准溶液:准确称取1.0000g经过96℃±2℃干燥2h的纯葡萄糖,加水溶解后加入5ml盐酸,并以水稀释至1000L。此溶液相当于1mg/ml葡萄糖(注:加盐酸的目的是防腐,标准溶液也可用饱和苯甲酸溶液配制)。
7. 果糖标准溶液:按⑹操作,配制每毫升标准溶液相当于1mg的果糖。8. 乳糖标准溶液:按⑹操作,配制每毫升标准溶液相当于1mg的乳糖。
9. 转化糖标准溶液:准确称取1.0526g纯蔗糖,用100ml水溶解,置于具塞三角瓶中加5ml盐酸(1+1),在68℃~70℃水浴中加热15min,放置至室温定容至1000ml,每ml标准溶液相当于1.0mg转化糖。Ⅲ、实验步骤 1.样品处理 ⑴ 乳类、乳制品及含蛋白质的食品:称取约2.50~5.00g固体样品(吸取25~50ml液体样品),置于250 ml容量瓶中,加50 ml水,摇匀。
边摇边慢慢加入5ml乙酸锌溶液及5ml亚铁氢化钾溶液,加水至刻度,混匀。静置30 min,用干燥滤纸过滤,弃去初滤液,滤液备用。
(注意:乙酸锌可去除蛋白质、鞣质、树脂等,使它们形成沉淀,经过滤除去。如果钙离子过多时,易与葡萄糖、果糖生成络合物,使滴定速度缓慢;从而结果偏低,可向样品中加入草酸粉,与钙结合,形成沉淀并过滤。)
⑵ 酒精性饮料:吸取100ml样品,置于蒸发皿中,用1 mol/L氢氧化钠溶液中和至中性,在水浴上蒸发至原体积1/4后,移入250ml容量瓶中,加水至刻度。 ⑶ 含多量淀粉的食品:称取10.00~20.00g样品,置于250ml容量瓶中,加200ml水,在45℃水浴中加热1h,并时时振摇(注意:此步骤是使还原糖溶于水中,切忌温度过高,因为淀粉在高温条件下可糊化、水解,影响检测结果。)
冷后加水至刻度,混匀,静置,沉淀。
吸取200ml上清液于另一250ml容量瓶中,慢慢加入5ml乙酸锌溶液及5ml亚铁氢化钾溶液,加水至刻度,混匀,沉淀,静置30 min,用干燥滤纸过滤,弃去初滤液,滤液备用。 ⑷ 汽水等含有二氧化碳的饮料:吸取100ml样品置于蒸发皿中,在水浴上除去二氧化碳后,移入250ml容量瓶中,并用水洗涤蒸发皿,洗液并入容量瓶中,再加水至刻度,混匀后备用。
(注意:样品中稀释的还原糖最终浓度应接近于葡萄糖标准液的浓度。) 2. 标定碱性酒石酸铜溶液:吸取5.0ml碱性酒石酸铜甲液及5.0ml乙液,置于150ml锥形瓶中(注意:甲液与乙液混合可生成氧化亚铜沉淀,应将甲液加入乙液,使开始生成的氧化亚铜沉淀重溶),加水10 ml,加入玻璃珠2粒,从滴定管滴加约9 ml葡萄糖标准溶液或其他还原糖标准溶液,直至溶液兰色刚好褪去为终点,记录消耗的葡萄糖标准溶液或其他还原糖标准溶液总体积,平行操作。
可溶性总糖的测定
【实验原理】
本实验采用蒽酮比色法测定可溶性糖的含量。糖在硫酸作用下生成糠醛,糠醛再与蒽酮作用形成绿色络合物,颜色的深浅与糖含量有关。在625 nm波长下的OD值与糖含量成正比。由于蒽酮试剂与糖反应的呈色强度随时间变化,故必须在反应后立即在同一时间内比色。该实验方法简便,但没有专一性,绝大部分的碳水化合物都能与蒽酮试剂反应,产生颜色。
【器材与试剂】
1. 实验仪器分光光度计,恒温水浴,电子天平,烘箱,刻度试管,漏斗
2. 实验试剂活性炭,乙醇
葡萄糖标准液:称取已在80℃烘箱中烘至恒重的葡萄糖100
mg,用80%乙醇配制成1000 ml溶液,即得每ml含糖为100
μg的标准液
蒽酮试剂:称取1 g
蒽酮,溶解于1000 ml稀硫酸(将760 ml相对密度为1.84的浓硫酸用蒸馏水稀释成1000
ml)溶液中,置于棕色瓶中,当日配置使用。
3. 实验材料植物叶片或种子
【实验步骤】
1.
可溶性糖的提取
植物叶片或种子在110℃烘箱烘15
min,然后调至70℃过夜。干叶片磨碎后称取50 mg样品倒入10
ml刻度离心管内加入4 ml 80%乙醇,置于80℃水浴中不断搅拌40
min,离心,收集上清液,其残渣加2 ml 80%乙醇重复提2次,合并上清液。在上清液中加10
mg活性炭,80℃脱色30 min,80%乙醇定容至10
ml,过滤后取滤液测定。
2.
绘制标准曲线
取20 ml带塞试管,编号,按下表配置系列浓度的标准葡萄糖溶液。然后在每只试管中加入5
ml蒽酮试剂,混匀,盖上塞子,在沸水浴中煮沸10
min(水浴重沸后计时),取出,立即用水冷却至室温,在625nm波长下,分别测量各管的光密度值,用0号管调零。以光密度为纵坐标,葡萄糖含量为横坐标,绘制标准曲线。
不好意思,淀粉DE值的测定我不大懂,我的生物化学知识只局限于高中水平!DE值,是英文(dextrose equivalent)的缩写,是葡萄糖当量或葡萄糖值的意思。
淀粉的转化程度以葡萄糖值表示(简称DE值), DE值=还原糖含量(以葡萄糖计)/淀粉干物质的量淀粉分解过程要求把淀粉全部分解,但又不完全分解为葡萄糖与麦芽糖,它还含有多种糖类的混合物。淀粉的水解过程是:淀粉-----糊精------高糖-----麦芽糖------葡萄糖下面是别人的方法,你可参考下:DE值的测定其实很简单,主要测定方法如下:根据试样还原糖的大小确定取样量。
DE值等于试样还原糖与试样干固物之比,你首先将试样的固形物测出来,如糖浆用阿贝折光仪测定,可直接读取固形物含量;如是麦芽糊精,则测定其水分,用100%减去水分即为固形物含量。例如:有一糖浆,其固形物为75%,DE值为40%,那么其还还原糖为0.75乘以40%为30%,那么取样就要取0.75~0.80g定容至250mL(使样液中每mL含有还原糖 1mg)按GB/T 5009.7测定。
你也可以参考QB/T2319—1997,这里面就有关于DE值的测定。
去百度文库,查看完整内容>
内容来自用户:zhenchengab
淀粉的国标测定方法|
测定食物中淀粉的方法有酶水解法、酸水解法、可消化淀粉和抗性淀粉的测定方法(酶-直接法)一、酶水解法1.原理样品经除去脂肪及可溶性糖类后,其中淀粉用淀粉酶水解成双糖,再用盐酸将双糖水解成单糖,最后按还原糖测定,并折算成淀粉。2.适用范围GB5009.9-85,适用于所有含淀粉的食物。3.仪器(1) 回流冷凝器(2) 水浴锅4.试剂除特殊说明外,实验用水为蒸馏水,试剂为分析纯。(1) 乙醚(2) 0.5 % 淀粉酶溶液:称取淀粉酶(Sigma公司, E.C3.2.1.1)0.5 g,加100ml水溶解,加入数滴甲苯或三氯甲烷,防止长霉,贮于冰箱中。(注:配成溶液的淀粉酶破坏很快,最好邻用现配。)(3) 碘溶液:称取3.6 g碘化钾溶于20 ml水中,加入1.3 g碘,溶解后加水稀释至100 ml。(4) 85 %乙醇。(5) 其余试剂同《蔗糖测定方法》5.操作方法5.1 样品处理称取2~5 g样品,置于放有折叠滤纸的漏斗内,先用50 ml乙醚分5次洗除脂肪(注:如果脂肪含量少,此步骤可免),再用约100 ml85 %乙醇洗去可溶性糖类(注:此步骤目的是去除可溶性糖),将残留物移入250 ml烧杯内,并用50ml水洗滤纸及漏斗,洗液并入烧杯内,将烧杯置沸水浴上加热15 min,使淀粉糊化,放冷至60 ℃以下,加20ml淀粉酶溶液,再55~60 ℃保温1h,并时时搅拌(注:温度过高,淀粉酶的活性破坏)。然后取1滴此液加1滴碘溶液,应不现兰色,若显兰色,再加热糊化并加20ml淀粉酶溶液,继续保温,直至加碘不显兰色为止
pro的测定方法分为两大类:一类是利用pro的共性,即含氮量,肽链和折射率测定pro含量,另一类是利用蛋白质中特定氨基酸残基、酸、碱性基团和芳香基团测定pro含量。
但是食品种类很多,食品中pro含量又不同,特别是其他成分,如碳水化合物,脂肪和维生素的干扰成分很多,因此pro的测定通常利用经典的剀氏定氮法是由样品消化成铵盐蒸馏,用标准酸液吸收,用标准酸或碱液滴定,由样品中含氮量计算出pro的含量。由于食品中pro含量不同又分为凯氏定氮常量法、半微量法和微量法,但它们的基本原理都是一样的。
用于制备淀粉的原料主要有薯类、玉米、小麦、大米等富含淀粉的农产品。
根据原料淀粉的性质及采用的催化剂不同,淀粉水解为葡萄糖的方法有酸解法、酶解法以及酸酶结合法等三种。 酶解法是在酶的作用下进行的,反应条件较温和,不需要耐高温高压或 而酸腐蚀的设备;酶作为催化剂的特点是专一性强,副反应少,故水解糖液纯度高,淀粉转化率高;可在较高的淀粉乳浓度下水解。
如酸解法一般使用10-12Bx(含18%--20%淀粉)的淀粉乳,而酶解法可用20—23Bx(含34%--40%淀粉)的淀粉乳,并且可以采用粗原料。用酶解法制得的糖液较纯净、颜色浅、无苦味、质量高,有利于糖液的充分利用。
酶解法反应时间较长,设备要求较多,且酶是蛋白质,易引起糖液过滤困难。当然,随着酶制剂生产及应用技术的提高,酶解法制糖将逐渐取代酸解法制糖。
声明:本网站尊重并保护知识产权,根据《信息网络传播权保护条例》,如果我们转载的作品侵犯了您的权利,请在一个月内通知我们,我们会及时删除。
蜀ICP备2020033479号-4 Copyright © 2016 学习鸟. 页面生成时间:3.790秒