离子色谱法使用(离子色谱系统的使用和维护需要的注意事项有哪些)

1.离子色谱系统的使用和维护需要的注意事项有哪些

离子色谱系统的使用和维护注意事项

1. 试剂用水需要到达 18.2M，洗脱液必须经 0.45um 或更小的滤膜抽滤（必 要时可用二层滤膜过滤）真空脱气后才可使用。滤膜为一次性，每次使 用前需要先过滤高纯水以清洗干净。抑制器再生液可以不过滤脱气。

2. 环境必须无腐蚀气体，通风良好。 样品一定要去除固体微粒后才能进样。如样品比较脏可以先用滤纸粗滤 后再过 0.45um 的滤膜过滤，一定要得到澄清液后才经滤头进样。对有颜 色的肮脏的样品要用做前处理后才可进样。

3. 洗脱液试剂需要优级纯以上。 分析柱不可摔打碰撞。 分析柱上有箭头表示洗脱液流进和流出的方向，不可以接反。 安装分析柱时，为避免气泡产生请按下述顺序安装： 拧开分析柱进口接 头螺丝，装好配制的洗脱液，排气泡后启动 IC 泵，待有溶液从管接头流 出后，把分析柱进口接头螺丝拧紧，待有溶液从分析柱出口流出时，不 要急于拧上出口接头螺丝，让溶液冲洗分析柱 5 分钟左右，然后再接上 分析柱出口接头螺丝。

4. 必须在有保护柱的情况下做样。 不要把样品中的气泡注射入分析柱。 10. 装标准的容量瓶不可用酸泡。

5. 高压 IC 泵不可空转。

6. 每天关机前要用淋洗脱液冲洗分析柱 30 分钟。

7. 电脑中的电源管理和屏幕保护要关闭。

2.请问离子色谱仪具体操作步骤有哪些

操作步骤 ：

1、打开钢瓶气源开关，分压表调到0.2-0.3（建议不关闭钢瓶气源）；

2、调节减压阀到3-6Psi左右；

3、依次打开SP泵、EG淋洗液自动发生器、DC色谱单元、AS自动进样器和VWD紫外检测器的电源开关。

4、如仪器长时间不使用或更换淋洗液后，要先打开平衡泵头上的PRIME阀排气。

5、打开电脑，待右下角变色龙服务器图标变灰色后，双击桌面的变色龙，打开控制面板。

6、开泵，根据连接的柱子设定泵流速（氨基酸0.22；糖PA10 1；糖PA200 0.4；阴离子1或1.2；氢氧化钾浓度30mM；阳离子CS18:0.25）；设定柱箱温度（30度）；

电导检测器：根据具体的试验条件，在控制面板DC页面选定抑制器类型和电流；在CD页面设定并开启检测器温度。

电化学检测器：在ED页面打开池子电压，选择CVMODE为INTAMP并

选定波形（WAVEFORM）。

7、系统平衡

8、编辑运行样品表（SEQUENCE）

9、系统平衡好后，停止采集基线，启动样品表（依次点击BATCH、START），选择要运行的样品表。

10、做完样后双击打开第一个标准，点击QNT-EDITER，进行数据处理。

11、关机前的工作

阴离子：如果样品很复杂，先用高浓度氢氧化钠（50-60mM氢氧化钠）清洗系统15-20分钟，然后在调到30mM正常浓度清洗30分钟；

阳离子：用正常淋洗液条件（5mM）冲洗系统20分钟；

糖PA10：使用200mM氢氧化钠冲洗系统15分钟，然后再换成18mM清洗15-20分钟；

氨基酸：最好在结束样品后走一空白梯度或进针水走一75分钟的梯度；

糖PA200：用100mM氢氧化钠/50mM醋酸钠走20分钟 。

12、关机

阴阳离子：将抑制器电流关掉，然后将泵逐步降为0； 氨基酸、糖：将电化学检测池电压关掉，然后将泵逐步降为0。 接着，断开AS、DC、EG、DP、VWD的连接。关闭各设备的电源。建议不要关掉氮气。

3.以离子交换色谱法为例,简述湿法装柱的操作过程和注意事项

1.样品处理：对被分离样品有时要经过水解等化学处理，样品溶液一般要兼顾到浓度与粘度两方面。

+ B4 ^: J i3 _) \- T: R/ |" v2.离子交换柱的安装：层析柱内径必须粗细均匀，柱管大小可据实际需要选择。柱下端胶塞中插入一放液管，胶塞上盖以园形尼龙绸或发泡塑料片以防止交换树脂流出。

+ H/ ?0 X, d' E2 P8 h& S- U3.装柱：⑴装柱质量是确保柱层析分离效果的技术关键之一，越是高技术层析（如使用毛细管层析柱的高级层析设备）装柱的技术要求和难度越高，以至手工操作很难达到。⑵装柱的质量要求，无论是手工、机械、自动化装柱都是一样的，要求装入柱中的分离载体材料松紧适度，分布均匀，无气泡、无断层、无结节，能保持正常的溶胀形态和结构；⑶装入柱中树脂的高度与直径之比因分离对象和分离目的不同而相差很大，本教材推荐的肝素钠洗脱柱装柱高度是柱径的4~6倍。

⑷操作次序，以手工装入溶胀的D254树脂（湿法装柱）为例，其操作程序可概括为：①查连接（柱与塞之间、上下塞与进出液管之间、梯度混合器与进液管之间、出液管与收集器之间等等的连接是否正确、紧密），②试止漏（塞子、接头、活塞开关处在长时间满负荷下不泄漏），③加隔离缓冲垫（紧贴于柱子下端塞子的内平面），④加少许平衡液于空柱内，⑤赶气泡（缓冲垫内和出水管中的气泡），⑥开通放水开关，⑦与放水量保持相当的流速，向柱内匀速加完载体材料浆，⑧关闭放水开关，令树脂自然下沉，⑨用洗涤液和清水洗涤树脂，⑩最后用缓冲液过柱和平衡柱，使树脂结构平衡稳定，⑾在树脂表面盖上一片尼龙或泡膜塑料，并与柱子内壁保持严密接触，以防加样时树脂泛起。 （ ？6 Y, g6 D5 S2 e- z% v b* m4.加样：缓缓打开柱子下端的放液开关，使柱内液面刚好降至树脂面时便立即将样品溶液小心地加到尼龙或泡膜塑料片上，待样品液面刚好进入树脂层内便立即加入少许平衡缓冲液，以清洗粘附在覆盖层中的样品，并随之进入树脂层。

当柱内液位接近树脂表面时便立即添加洗涤液进行洗涤操作。$ o+ c9 M: n3 `% Q 5.洗涤：选用合适的洗涤液、恰当的总用量及洗涤流速，小心洗涤柱内树脂，以除去不被离交树脂吸附的杂质。

： K0 s* j/ p; W4 d） o7 W6 _ 6.洗脱：由洗脱曲线找出洗脱液的最佳浓度和适当的总量、操作压及流速进行洗脱。 5 m- U F# X! m' M. O# g! |7.监测：用敏感快速的方法（参见下文“测定”）监测分离成分是否洗脱出来以及洗脱峰的轴向分布 9 v2 C$ h- _- \: S8.收集：一旦发现待分离成分洗脱出来便可进行一步或分步收集，并可根据各成分洗脱峰的轴向分布和浓度监测，决定产品收集浓度区段，弃去的洗脱液可循环用于相同成分的洗脱。

1 v7 I2 v8 H, m8 y3 ] M; J8 m9.沉淀/离心：用沉淀剂可将分离组分沉淀或离心下来脱水干燥，沉淀剂回收再用。 " a3 @7 z0 a' t10.脱水干燥：加入适当脱水剂为如无水乙醇、丙酮或乙醚脱水后进一步干燥。

5 _" H" J" X0 e% v" V 11.测定：对层析所得产品可称重或测定活性计算其得量和收率。. ^7 ]4 x, e- `1 p# y- z. d7 g9 m5 ` 【注意事项】4 G; U! }* `$ X7 C" b: b0 f 1.应根据被分离物质的理化性质、分子大小、分子形状和分离的目的要求，选择分离效果好、交换容量大而机械强度较高的分离载体材料。

市售的分离载体有明确的规格型号、理化性质、功能作用、活化再生和保养存放等技术参数资料可供用户选择。 * K7 Q, U. T% x8 y5 R2.应根据分离纯化的对象、规模选择层析柱的长短、粗细、柱高与内径之比，使达到最佳分离效果；此外，柱子材料的化学性质要稳定、透明，内径要均一、光滑，死腔要愈小愈好，要有利于紧固、连接、装柱与维护。

4 E& F! k7 Q. W3 [& s/ k( ?- P3.柱子安放要垂直、稳固，与之相连的各种线路、管道、设备、设施的布局和连接要紧奏，要方便操作、观察与维护。4 F5 w( v8 w+ c4 C 4.要求装入柱中的分离载体材料松紧适度，分布均匀，无气泡、无断层、无结节，能保持正常的溶胀形态和结构。

5 F n1 O% }8 d z+ T0 L# t2 |3 C 5.保持柱内树脂层面平整、层序结构始终如一是确保柱层析分离效果的又一技术关键。为此，从装柱到洗脱结束的过程中，尤其是加样、洗涤、洗脱过程中要始终保持柱内液位不低于柱内树脂的顶部平面，尤其要始终保持柱内树脂的层序结构始终如一，不被打乱，特别要防止更换浓度不同的洗涤洗脱液时发生“翻缸”而搅乱树脂层结构，“压缸”而造成柱层断裂和梗塞断流。

7 z/ W" C+ E8 q: i& t g6.注意保持一定的操作压，这对确保层析柱流速和分离效果十分重要。因为流速不仅与洗脱液加在柱上的压力（因液面差造成）有关，也与装柱材料的粒度、交联度、机械强度有关。

应针对具体情况建立一个操作压、流速和分离效果的最佳平衡点。 ； N( j K7 n0 T" {9 [$ S6.显著标明各种洗涤、洗脱液的技术参数，严禁乱用和混用。

) M) k" o* {2 g( F 7.制作洗脱曲线，确定洗脱液收集方案，设置洗脱监控点。2 N; I* F% \6 e9 I5 J% X1 V 8.注意剔除破损树脂，及时补足流失、破损的循环树脂量。

# S5 F F8 K3 V2 ]9 A1 E6 U+ o9.严格掌握新、旧树脂的活化、再生条件，及时再生旧树脂。

4.离子色谱常见问题有哪些

1、电导检测器常见故障

电导检测器常见故障是检测池被污染。

故障原因：污染物主要来源于没有经过适当前处理的样品，如浓度过高、复杂的样品基体等。

故障现象：基线噪声变大，灵敏度降低。

2、分析泵常见故障

分析泵常见故障是泵内产生气泡和漏液

故障现象：基线的噪声加大，色谱峰形变差（出现乱峰）。

3、抑制器使用中的常见故障与排除

抑制器在离子色谱仪中具有举足轻重的作用。抑制器工作性能的好坏对分析结果有很大的影响。抑制器最常见的故障是漏液，使峰面积减小（灵敏度下降）和背景电导升高。

(1)峰面积减小

造成峰面积减小的主要原因有：微膜脱水、抑制器漏液、溶液流路不畅和微膜被玷污。抑制器长期不用，会发生微膜脱水现象，为激活抑制器，可用注射器向阴离子抑制器内以淋洗液流路相反的方向注入少许0.2mol/L的硫酸溶液。同时向再生液进口注入少许纯净水，并将抑制器放置半小时以上。抑制器内玷污的金属离子可以用草酸钠清洗。

(2)背景电导值高

在化学抑制型电导检测分析过程中，若背景电导高，说明抑制器部分存在一定的问题。大多数是操作不当引起的。例如淋洗液或再生液流路堵塞，系统中无溶液流动造成背景电导偏高或使用的电抑制器电流设置的太小等。膜被污染后交换容量下降亦会使背景电导升高。而失效的抑制器在使用时会出现背景电导持续升高的现象，此时应更换一支新的抑制器。

(3)漏液

抑制器漏液的主要原因是抑制器内的微膜没有充分水化。

因此，长时间未使用的抑制器在使用前应让微膜水溶胀后再使用。另外要保证再生液出口顺畅，因此反压较大时也会造成抑制器漏液。另外抑制器保管不当造成抑制器内的微膜收缩、破裂也会发生漏液现象。