MS培养基是Murashige和Skoog于1962年
为烟草细胞培养设计的,其特点是无机
盐和离子浓度较高,是较稳定的离子平
衡溶液,它的硝酸盐含量高,其养分的
数量和比例合适,能满足植物细胞的营
养和生理需要,因而适用范围比较广,多
数植物组织培养快速繁殖用它作为培养
基的基本培养基。
注意事项:
1.母液Ⅱ及母液Ⅳ的配制方法是:每
种母液中的几种成分称量完毕后,分别
用少量的蒸馏水彻底溶解,然后再将它
们混溶,最后定容到1
2.母液Ⅲ的配制方法是:将称好的
FeSO4·7H2O和Na2-EDTA·2H2O分别
放到450
mL蒸馏水中,边加热边不断搅
拌使它们溶解,然后将两种溶液混合,
并将pH调至5.5,最后定容到1
L,保存
在棕色玻璃瓶中。
3.MS培养基中还需要加入2,4-二氯苯
氧乙酸(2,4-D)、萘乙酸(NAA)、6
苄基
嘌呤(6BA)等植物生长调节物质,并且分
别配成母液(0
1
mg/mL)。其配制方法
是:分别称取这3种物质各10
mg,将
2,4-D和NAA用少量(1
mL)无水乙醇预
溶,将6BA用少量(1
mL)的物质的量浓
度为0.1
mol/L的NaOH溶液溶解,溶解过
程需要水浴加热,最后分别定容至100
mL,即得质量浓度为0
1
mg/mL的母液。
4.组织培养是否能够获得成功,主要取
决于对培养基的选择。不同的培养基具
有不同的特点,也就适合于不同的植物
种类和接种材料。在开展组织培养项目
时,首先要对各种培养基进行了解和分
析,以便能从中选择合适的使用。组培
用的培养基一般包括基础培养基和激
素,但是植物激素的种类和数量,随着
不同培养阶段和不同材料有变化,因此
各培养基配方中均不列入植物激素。
配制培养液时应注意:
①在使用提前配制的母液时,应在量取各种母液之前,轻轻摇动盛放母液的瓶子,如果发现瓶中有沉淀、悬浮物或被微生物污染,应立即淘汰这种母液,重新进行配制;为防止母液被微生物污染,有机母液放在冰箱里4℃保存;
②用量筒或移液管量取培养基母液之前,必须用所量取的母液将量筒或移液管润洗2次;
③量取母液时,最好将各种母液按将要量取的顺序写在纸上,量取1种,划掉1种,以免出错。溶化琼脂 用粗天平分别称取琼脂9 g、蔗糖30 g,放入1 000 mL的搪瓷量杯中,再加入蒸馏水750 mL,用电炉加热,边加热边用玻璃棒搅拌,直到液体呈半透明状。然后再将配好的混合培养液加入到煮沸的琼脂中,最后加蒸馏水定容至1 000 mL,搅拌均匀。
需要注意的是,在加热琼脂,制备培养基的过程中,操作者千万不能离开,否则沸腾的琼脂外溢,就需要重新称量、制备。此外,如果没有搪瓷量杯,可用大烧杯代替。但要注意大烧杯底的外表面不能沾水,否则加热时烧杯容易炸裂,使溶液外溢,造成烫伤。调pH 用滴管吸取物质的量浓度为1 mol/L的NaOH溶液,逐滴滴入溶化的培养基中,边滴边搅拌,并随时用pH试纸测培养基的pH,一直调到培养基的pH为6(5.8~6.5)左右为止。培养基的分装 溶化的培养基应该趁热分装。分装时,先将培养基倒入烧杯中,然后将烧杯中的培养基倒入锥形瓶(50 mL或100 mL)中。注意不要让培养基沾到瓶口和瓶壁上。锥形瓶中培养基的量约为锥形瓶容量的1/5~1/4。每1 000 mL培养基,可分装25~30瓶。培养基分装完毕后,应及时封盖瓶口。用2块硫酸纸(每块大小约为9 cm*9 cm)中间夹1层薄牛皮纸封盖瓶口,并用线绳捆扎。最后在锥形瓶外壁贴上标签。
去百度文库,查看完整内容>内容来自用户:MBBMMS培养基母液的配制:20*MS大量元素(1 L):38 g KNO3,33 g NH4NO3,8.8 g CaCl2·2H2O,7.4 g MgSO4·7H2O,3.4 g KH2PO4。
200*MS微量元素(1 L):0.166 g KI,1.24 g H3BO3,4.46 g MnSO4·4H2O,1.72 g ZnSO4·7H2O,0.05 g Na2MoO4·2H2O,0.005 g CuSO4·5H2O,0.005 g CoCl2·6H2O。200*MS维生素和氨基酸(1 L):20 g肌醇,0.1 g烟酸,0.1 g盐酸吡哆醇(VB6),0.02 g盐酸硫胺素(thiamine hydrochloride, VB1),0.4 g甘氨酸。
200*MS铁盐(1 L):5.56 g FeSO4·7H2O,7.46 g Na2EDTA·2H2O,先溶于500 mL ddH2O,加热,调pH至5.5,定容至1 L。注意:配制大量元素母液时,为避免产生沉淀,要用纯度高的重蒸馏水溶解,药品采用分析纯。
化学药品先以少量重蒸馏水充分溶解后然后混合,混合时需注意边搅拌边混合。CaCl2·2H2O要在最后单独加入,在溶解CaCl2·2H2O时,蒸馏水需加热沸腾,除去水中的CO2,以防沉淀。
配制铁盐母液时,FeSO4和Na2-EDTA应分别加热溶解后混合,并置于磁力搅拌器上不断搅拌至溶液呈金黄色(约加热20-30 min),调pH值至5 .5,室温放置冷却后,再冷藏。使用上述配好的母液,按照稀释倍数,配制基础MS培养液:1*MS大量元素,1*MS微量元素,1*MS维生素和氨基酸,1*MS铁盐,蔗糖30 g/L,定容后调节pH至5.8,高温高压灭菌。
固体培养基含植物凝胶3.5 g/L或琼脂9 g/L。另MS基本培养基可用Murashige and Skoog Basal Salt Mixture。
刚刚复习了这里,借花献佛~~ 培养基配制应遵循的原则 1、根据不同微生物的营养需要配制不同的培养基。
2、注意各种营养物质的浓度及合适配比,保持合适渗透压 。 3、将培养基的 pH 控制在适宜的范围之内,以利于不同类型微生物的生长繁殖或代谢产物的积累。
4、经济节约的原则。在所选培养基成分能满足微生物培养要求的前提下,尽可能选用价格低廉,资源丰富的材料作培养基成分。
5、控制氧化还原电位。对厌氧的微生物尤其重要。
6、培养基应无菌。故在培养基配制后应彻底杀死培养基中的杂菌 。
刚刚复习了这里,借花献佛~~ 培养基配制应遵循的原则 1、根据不同微生物的营养需要配制不同的培养基。
2、注意各种营养物质的浓度及合适配比,保持合适渗透压 。 3、将培养基的 pH 控制在适宜的范围之内,以利于不同类型微生物的生长繁殖或代谢产物的积累。
4、经济节约的原则。在所选培养基成分能满足微生物培养要求的前提下,尽可能选用价格低廉,资源丰富的材料作培养基成分。
5、控制氧化还原电位。对厌氧的微生物尤其重要。
6、培养基应无菌。故在培养基配制后应彻底杀死培养基中的杂菌 。
原发布者:鲨鱼鲜生
MS培养基母液的配制:20*MS大量元素(1L):38gKNO3,33gNH4NO3,8.8gCaCl2·2H2O,7.4gMgSO4·7H2O,3.4gKH2PO4。200*MS微量元素(1L):0.166gKI,1.24gH3BO3,4.46gMnSO4·4H2O,1.72gZnSO4·7H2O,0.05gNa2MoO4·2H2O,0.005gCuSO4·5H2O,0.005gCoCl2·6H2O。200*MS维生素和氨基酸(1L):20g肌醇,0.1g烟酸,0.1g盐酸吡哆醇(VB6),0.02g盐酸硫胺素(thiaminehydrochloride,VB1),0.4g甘氨酸。200*MS铁盐(1L):5.56gFeSO4·7H2O,7.46gNa2EDTA·2H2O,先溶于500mLddH2O,加热,调pH至5.5,定容至1L。注意:配制大量元素母液时,为避免产生沉淀,要用纯度高的重蒸馏水溶解,药品采用分析纯。化学药品先以少量重蒸馏水充分溶解后然后混合,混合时需注意边搅拌边混合。CaCl2·2H2O要在最后单独加入,在溶解CaCl2·2H2O时,蒸馏水需加热沸腾,除去水中的CO2,以防沉淀。配制铁盐母液时,FeSO4和Na2-EDTA应分别加热溶解后混合,并置于磁力搅拌器上不断搅拌至溶液呈金黄色(约加热20-30min),调pH值至5.5,室温放置冷却后,再冷藏。使用上述配好的母液,按照稀释倍数,配制基础MS培养液:1*MS大量元素,1*MS微量元素,1*MS维生素和氨基酸,1*MS铁盐,蔗糖30g/L,定容后调节pH至5.8,高温高压灭菌。固体培养基含植物凝胶3.5g/L或琼脂9g/L。另MS基本培养基可用(Sigma-Aldrich)快速配制。播种方法:
植物组织培养中常用的一种培养基是MS培养基。
MS培养基的配制包括以下步骤。 培养基母液的配制和保存 MS培养基含有近30种营养成分,为了避免每次配制培养基都要对这几十种成分进行称量,可将培养基中的各种成分,按原量的20倍或200倍分别称量,配成浓缩液,这种浓缩液叫做培养基母液。
这样每次使用时,取其总量的1/20(50 mL)或1/200(5 mL),加水稀释,制成培养液。现将制备培养基母液所需的各类物质的量列出,供配制时使用。
大量元素(母液Ⅰ) mg/L NH4NO3 33 000 KNO3 38 000 CaCl2·2H2O 8 800 MgSO4·7H2O 7 400 KH2PO4 3 400 微量元素(母液Ⅱ) KI 166 H3BO3 1 240 MnSO4·4H2O 4 460 ZnSO4·7H2O 1 720 Na2MoO4·2H2O 50 CuSO4·5H2O 5 CoCl2·6H2O 5 铁盐(母液Ⅲ) FeSO4·7H2O 5 560 Na2-EDTA·2H2O 7 460 有机成分(母液Ⅳ) ⅣA 肌醇 20 000 ⅣB 烟酸 100 盐酸吡哆醇(维生素B6) 100 盐酸硫胺素(维生素B1) 100 甘氨酸 400 以上各种营养成分的用量,除了母液Ⅰ为20倍浓缩液外,其余的均为200倍浓缩液。 上述几种母液都要单独配成1 L的贮备液。
其中,母液Ⅰ、母液Ⅱ及母液Ⅳ的配制方法是:每种母液中的几种成分称量完毕后,分别用少量的蒸馏水彻底溶解,然后再将它们混溶,最后定容到1 L。 母液Ⅲ的配制方法是:将称好的FeSO4·7H2O和Na2-EDTA·2H2O分别放到450 mL蒸馏水中,边加热边不断搅拌使它们溶解,然后将两种溶液混合,并将pH调至55,最后定容到1 L,保存在棕色玻璃瓶中。
各种母液配完后,分别用玻璃瓶贮存,并且贴上标签,注明母液号、配制倍数、日期等,保存在冰箱的冷藏室中。 MS培养基中还需要加入2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)、萘乙酸(NAA)、6苄基嘌呤(6BA)等植物生长调节物质,并且分别配成母液(01 mg/mL)。
其配制方法是:分别称取这3种物质各10 mg,将2,4-D和NAA用少量(1 mL)无水乙醇预溶,将6BA用少量(1 mL)的物质的量浓度为0.1 mol/L的NaOH溶液溶解,溶解过程需要水浴加热,最后分别定容至100 mL,即得质量浓度为01 mg/mL的母液。 配制培养液 用量筒或移液管从各种母液中分别取出所需的用量:母液Ⅰ为50 mL,母液Ⅱ、Ⅲ、ⅣA和ⅣB各5 mL。
再取2,4D 5 mL、NAA 1 mL,与各种母液一起放入烧杯中。 配制培养液时应注意:①在使用提前配制的母液时,应在量取各种母液之前,轻轻摇动盛放母液的瓶子,如果发现瓶中有沉淀、悬浮物或被微生物污染,应立即淘汰这种母液,重新进行配制;②用量筒或移液管量取培养基母液之前,必须用所量取的母液将量筒或移液管润洗2次;③量取母液时,最好将各种母液按将要量取的顺序写在纸上,量取1种,划掉1种,以免出错。
溶化琼脂 用粗天平分别称取琼脂9 g、蒸糖30 g,放入1 000 mL的搪瓷量杯中,再加入蒸馏水750 mL,用电炉加热,边加热边用玻璃棒搅拌,直到液体呈半透明状。然后再将配好的混合培养液加入到煮沸的琼脂中,最后加蒸馏水定容至1 000 mL,搅拌均匀。
需要注意的是,在加热琼脂、制备培养基的过程中,操作者千万不能离开,否则沸腾的琼脂外溢,就需要重新称量、制备。此外,如果没有搪瓷量杯,可用大烧杯代替。
但要注意大烧杯底的外表面不能沾水,否则加热时烧杯容易炸裂,使溶液外溢,造成烫伤。 调pH 用滴管吸取物质的量浓度为1 mol/L的NaOH溶液,逐滴滴入溶化的培养基中,边滴边搅拌,并随时用精密的pH试纸(54~70)测培养基的pH,一直到培养基的pH为58为止(培养基的pH必须严格控制在58)。
培养基的分装 溶化的培养基应该趁热分装。分装时,先将培养基倒入烧杯中,然后将烧杯中的培养基倒入锥形瓶(50 mL或100 mL)中。
注意不要让培养基沾到瓶口和瓶壁上。锥形瓶中培养基的量约为锥形瓶容量的1/5~1/4。
每1 000 mL培养基,可分装25~30瓶。 培养基分装完毕后,应及时封盖瓶口。
用2块硫酸纸(每块大小约为9 cm*9 cm)中间夹1层薄牛皮纸封盖瓶口,并用线绳捆扎。最后在锥形瓶外壁贴上标签。
高压灭菌 培养基的高压灭菌包括以下几个步骤。 第一,码放锥形瓶。
将装有培养基的锥形瓶直立于金属小筐中,再放入高压蒸气灭菌锅内。如果没有金属小筐,可以在两层锥形瓶之间放一块玻璃板隔开。
第二,放置其他需要灭菌的物品。将其他需要灭菌的物品也放入高压蒸气灭菌锅内,如装有蒸馏水的锥形瓶、带螺口盖的玻璃瓶、烧杯、广口瓶(以上物品都要用牛皮纸封口),用牛皮纸包裹的培养皿、剪刀、解剖刀、镊子、滤纸、铅笔等。
第三,灭菌。待需要灭菌的物品码放完毕,盖上锅盖。
在98 kPa、121.3 ℃下,灭菌20 min。 灭菌后取出锥形瓶,让其中的培养基自然冷却凝固。
最好放置1 d后再使用。
MS培养基的配制
植物组织培养中常用的一种培养基是MS培养基。MS培养基的配制包括以下步骤。
培养基母液的配制和保存 MS培养基含有近30种营养成分,为了避免每次配制培养基都要对这几十种成分进行称量,可将培养基中的各种成分,按原量的20倍或200倍分别称量,配成浓缩液,这种浓缩液叫做培养基母液。这样每次使用时,取其总量的1/20(50 mL)或1/200(5 mL),加水稀释,制成培养液。现将制备培养基母液所需的各类物质的量列出,供配制时使用。
大量元素(母液Ⅰ) mg/L
NH4NO3 33 000
KNO3 38 000
CaCl2·2H2O 8 800
MgSO4·7H2O 7 400
KH2PO4 3 400
微量元素(母液Ⅱ)
KI 166
H3BO3 1 240
MnSO4·4H2O 4 460
ZnSO4·7H2O 1 720
Na2MoO4·2H2O 50
CuSO4·5H2O 5
CoCl2·6H2O 5
铁盐(母液Ⅲ)
FeSO4·7H2O 5 560
Na2-EDTA·2H2O 7 460
有机成分(母液Ⅳ)
ⅣA
肌醇 20 000
ⅣB
烟酸 100
盐酸吡哆醇(维生素B6) 100
盐酸硫胺素(维生素B1) 100
甘氨酸 400
以上各种营养成分的用量,除了母液Ⅰ为20倍浓缩液外,其余的均为200倍浓缩液。
培养基母液的配制和保存 MS培养基含有近30种营养成分,为了避免每次配制培养基都要对这几十种成分进行称量,可将培养基中的各种成分,按原量的20倍或200倍分别称量,配成浓缩液,这种浓缩液叫做培养基母液。这样每次使用时,取其总量的1/20(50 mL)或1/200(5 mL),加水稀释,制成培养液。现将制备培养基母液所需的各类物质的量列出,供配制时使用。
大量元素(母液Ⅰ) mg/L
NH4NO3 33 000
KNO3 38 000
CaCl2·2H2O 8 800
MgSO4·7H2O 7 400
KH2PO4 3 400
微量元素(母液Ⅱ)
KI 166
H3BO3 1 240
MnSO4·4H2O 4 460
ZnSO4·7H2O 1 720
Na2MoO4·2H2O 50
CuSO4·5H2O 5
CoCl2·6H2O 5
铁盐(母液Ⅲ)
FeSO4·7H2O 5 560
Na2-EDTA·2H2O 7 460
有机成分(母液Ⅳ)
ⅣA
肌醇 20 000
ⅣB
烟酸 100
盐酸吡哆醇(维生素B6) 100
盐酸硫胺素(维生素B1) 100
甘氨酸 400
以上各种营养成分的用量,除了母液Ⅰ为20倍浓缩液外,其余的均为200倍浓缩液。
上述几种母液都要单独配成1 L的贮备液。其中,母液Ⅰ、母液Ⅱ及母液Ⅳ的配制方法是:每种母液中的几种成分称量完毕后,分别用少量的蒸馏水彻底溶解,然后再将它们混溶,最后定容到1 L。
母液Ⅲ的配制方法是:将称好的FeSO4·7H2O和Na2-EDTA·2H2O分别放到450 mL蒸馏水中,边加热边不断搅拌使它们溶解,然后将两种溶液混合,并将pH调至5
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