蛋白质沉淀变性反应(蛋白质的沉淀试验和颜色反应试验应注意什么问题)

1.蛋白质的沉淀试验和颜色反应试验应注意什么问题

蛋白质分子凝聚从溶液中析出的现象称为蛋白质沉淀（precipitation），变性蛋白质一般易于沉淀，但也可不变性而使蛋白质沉淀，在一定条件下，变性的蛋白质也可不发生沉淀。

蛋白质所形成的亲水胶体颗粒具有两种稳定因素，即颗粒表面的水化层和电荷。若无外加条件，不致互相凝集。

然而除掉这两个稳定因素（如调节溶液pH至等电点和加入脱水剂）蛋白质便容易凝集析出。 可以看出，如将蛋白质溶液pH调节到等电点，蛋白质分子呈等电状态，虽然分子间同性电荷相互排斥作用消失了。

但是还有水化膜起保护作用，一般不致于发生凝聚作用，如果这时再加入某种脱水剂，除去蛋白质分子的水化膜，则蛋白质分子就会互相凝聚而析出沉淀；反之，若先使蛋白质脱水，然后再调节pH到等电点，也同样可使蛋白质沉淀析出。

2.蛋白质的沉淀试验和颜色反应试验应注意什么问题

蛋白质分子凝聚从溶液中析出的现象称为蛋白质沉淀（precipitation），变性蛋白质一般易于沉淀，但也可不变性而使蛋白质沉淀，在一定条件下，变性的蛋白质也可不发生沉淀。

蛋白质所形成的亲水胶体颗粒具有两种稳定因素，即颗粒表面的水化层和电荷。若无外加条件，不致互相凝集。然而除掉这两个稳定因素（如调节溶液pH至等电点和加入脱水剂）蛋白质便容易凝集析出。

可以看出，如将蛋白质溶液pH调节到等电点，蛋白质分子呈等电状态，虽然分子间同性电荷相互排斥作用消失了。但是还有水化膜起保护作用，一般不致于发生凝聚作用，如果这时再加入某种脱水剂，除去蛋白质分子的水化膜，则蛋白质分子就会互相凝聚而析出沉淀；反之，若先使蛋白质脱水，然后再调节pH到等电点，也同样可使蛋白质沉淀析出。

3.做蛋白质的沉淀试验和颜色反应实验时应该注意哪些问题

其中碳氢被氧化为二氧化碳和水逸出，蛋白质中的氮转化为氨与硫酸结合生成硫酸氯在硫酸中，然后加碱蒸馏，使氨逸出，用硼酸吸收，再以硫酸或盐酸标准溶液滴定.根据酸的消耗量乘以换算系数为蛋白质含量.笔者根据多年来操作经验认为，在检验过程中应注意如下三个环节.一、样品、试剂加入量的控制.1.称取试样的多少取决于样品中蛋白质的高低.蛋白质中含氮量较恒定，通常是通过测定食品中氮的含量来确定蛋白质的含量.一般固体样品称取0.2-2.0g，半固体样品称取2—5g，液体样品吸取10-20ml.样品中含氮量低的可增加称样量.2.硫酸的加入量，通常加20ml，但试样量如超过5g时，应按每克试样5ml的比例增加硫酸用量.否则试样消化不完全造成结果偏低.3.消泡剂的加入.含脂肪或糖较多的食品在消化时产生大量泡沫，溢出瓶外，造成氮的损失，所以消化前可加入少量消泡齐lj.如：液体石蜡、硅消泡剂等.4.催化剂的加入量要适宜硫酸铜是最理想的催化剂，效果好，价格便宜，环境污染小，而且是蒸馏加碱时的指示剂.硫酸钾可加快有机物的分解，使硫酸沸点从34.0℃提高到40.0℃以上，但加入量不能太大，否则温度过高会使铵盐分解而文——胡惠敏造成损失，除硫酸钾外硫酸钠也有同样作用.5.难消化的样品还可适当加入少量过氧化氢，次氯酸钠等氧化剂加速有机物氧化.二、样品消化处理.1.样品一定要移入干燥的凯氏烧瓶中，否则样品易粘在瓶壁上不易消化.加硫酸时应将附在瓶壁上的粉末仔细洗至瓶中，使样品全部消化.还有在消化时注意转动凯氏烧瓶，利用冷凝酸液将附在瓶壁上的碳粒冲下促进完全消化.2.样品与试剂加入摇匀后瓶口应放一小漏斗，将瓶倾斜45.角斜至有小孔的石棉网上，小心加热，避免喷溅.待瓶内试样全部碳化，泡沫完全停止后，再加强火力，并保持瓶内液体微沸，至液体呈澄清透明的蓝绿色后再加热半小时，样品即消化完全.三、蒸馏过程中条件的控制.1.蒸馏对温度、时间都有要求.热源温度过低直接影响氯的逸出，从而导致结果偏低.蒸馏时间应控制在30分钟左右，时间过少氯放出时间不足，使结果偏低，样品应在温度较高（1000W）的电炉子上蒸馏为宜，达到规定时间后应用PH试纸测出馏出液是否呈中性，若碱性应延长蒸馏时间直至中性.2.氢氧化钠的加入量.在蒸馏过程中，烧瓶内溶液应保持碱性，因此经消化处理样品加氢氧化钠后，瓶内液体在加热沸腾后溶液呈黑色，如果呈兰色，说明氢氧化钠的加入量不足，应补加至分解液呈黑褐色.3.硼酸作为吸收液.由于硼酸是极弱的酸，只起吸收氯的作用，不影响碱滴定，但要注意硼酸吸收液温度不应超过40℃，否则氯吸收减弱，造成损失.4.蒸馏装置不能漏气.蒸馏过程中不能停火断气避免发生倒吸，蒸馏完毕先将蒸馏出1:3离开液面，继续蒸馏1分钟，将附着在尖端的吸收液完全洗入吸收瓶内，否则吸收液体将发生倒吸造成意外.5.在滴定过程中一定要将滴管中的气泡赶出，使之在0刻度线时开始滴定，滴定时不要过快，以免达到终点时不好控制.总之，在检验过程中注意以上几点，才能减少误差，确保俭测结果与真实值一致。

4.蛋白质的盐析与变性有何不同

1、性质不同：盐析是在蛋白质水溶液中加入中性盐，随着盐浓度增大而使蛋白质沉淀出来的现象。蛋白质变性是受物理或化学因素的影响，改变其分子内部结构和性质的作用。

2、特点不同：蛋白质变性的同一多肽链中的氨基和酰基之间可以形成氢键或肽链间形成氢键，使得这一多肽链的主链具有一定的有规则构象。盐析在蛋白质溶液中，一方面与蛋白质争夺水分子，破坏蛋白质胶体颗粒表面的水膜。

3、原理不同：盐析破坏了蛋白质在水中稳定存在的二个因素，从而使蛋白质发生沉淀。蛋白质变性能使蛋白质变性的物理方法有加热（高温）、紫外线及X射线照射、超声波、剧烈振荡或搅拌等。

扩展资料：

注意事项：

1、蛋白质经强酸、强碱作用发生变性后，仍能溶解于强酸或强碱溶液中，若将pH调至等电点，则变性蛋白质立即结成絮状的不溶解物，此絮状物仍可医`学教育网搜集整理溶解于强酸和强碱中。

2、如再加热则絮状物可变成比较坚固的凝块，此凝块不易再溶于强酸和强碱中。

3、若蛋白质变性程度较轻，去除变性因素后，有些蛋白质仍可恢复或部分恢复其原有的构象和功能。

参考资料来源：百度百科-蛋白质变性

参考资料来源：百度百科-盐析