1,pH值的影响。
楼主在实验中两次用到缓冲液调节pH=5。5,但是在最后显色的一步是在加热的状况下进行的。
没有在反应过程中检测pH值的变化,导致颜色不是Ruhemann紫。而茚三酮与氨基酸作用得到的蓝紫色物质是一种铵盐。
从结构上看,季铵和还原的酮的氧连在一起,这本来就是个亚稳定结构。 季铵盐容易把H+给O得到一个羟基,所以很依赖pH的变化。
那么你的溶液不停变化吸光度就能解释了,是由于Ruhemann紫因pH不适不断释放NH3或NH4+的结果。这个情况一般是由于pH值过大引起的。
2,没有反应完全。在进行样品沉降时其实很有可能残留了许多蛋白质和多肽。
多肽和蛋白质也能形成这个反应,但是肽越大反应就越不灵敏。所以有可能是第三产物,中间得到的醛可能会影响了这个反应,可能会生成其他带有颜色的副产物干扰紫色的呈现。
但是在逐渐反应后,醛由于大基团逐渐分解对反应的影响越来越小,这个干扰也就变小了,实际的紫色浓度自然比原来要弱许多。 以上只是个人推测,没有依据。
建议你用其它方法测定,比如用茚三酮作显色剂的纸层析色谱,不仅可以计算总量,还可以初步估计氨基酸种数。
根据外伤史、临床症状和检查,判断神经损伤的部位、性质和程度。
一、临床检查 1。伤部检查 检查有无伤口,如有伤口,应检查其范围和深度、软组织损伤情况以及有无感染。
查明枪弹伤或弹片伤的径路,有无血管伤、骨折或脱臼等。如伤口已愈合,观察瘢痕情况和有无动脉瘤或动静脉瘘形成等。
2。肢体姿势 观察肢体有无畸形。
桡神经伤有腕下垂;尺神经伤有爪状手,即第4、5指的掌指关节过伸,指间关节屈曲;正中神经伤有猿手;腓总神经伤有足下垂等。如时间过久,因对抗肌肉失去平衡,可发生关节挛缩等改变。
3。运动功能的检查 根据肌肉瘫痪情况判断神经损伤及其程度,用六级法区分肌力。
0级——无肌肉收缩; 1级——肌肉稍有收缩; 2级——不对抗地心引力方向,能达到关节完全动度; 3级——对抗地心引力方向,能达到关节完全动度,但不能加任何阻力; 4级——对抗地心引力方向并加一定阻力,能达到关节完全动度; 5级——正常。 周围神经损伤引起肌肉软瘫,失去张力,有进行性肌肉萎缩。
依神经损伤程度不同,肌力有上述区别,在神经恢复过程中,肌萎缩逐渐消失,如坚持锻炼可有不断进步。 4。
感觉功能的检查 检查痛觉、触觉、温觉、两点区别觉及其改变范围,判断神经损伤程度。一般检查痛觉及触觉即可。
注意感觉供给区为单一神经或其它神经供给重叠,可与健侧皮肤比较。实物感与浅触觉为精细感觉,痛觉与深触觉为粗感觉。
神经修复后,粗感觉恢复较早较好。 感觉功能障碍亦可用六级法区别其程度: 0级——完全无感觉; 1级——深痛觉存在; 2级——有痛觉及部分触觉; 3级——痛觉和触觉完全; 4级——痛、触觉完全,且有两点区别觉,惟距离较大; 5级——感觉完全正常。
5。营养改变 神经损伤后,支配区的皮肤发冷、无汗、光滑、萎缩。
坐骨神经伤常发生足底压疮,足部冻伤。无汗或少汗区一般符合感觉消失范围。
可作出汗试验,常用的方法有(1)碘—淀粉试验:在手指掌侧涂2%碘溶液,干后涂抹一层淀粉,然后用灯烤,或饮热水后适当运动使病人出汗,出汗后变为兰色。 (2)茚三酮(Ninhydrin)指印试验;将患指或趾在干净纸上按一指印(亦可在热饮发汗后再按)。
用铅笔画出手指足趾范围,然后投入1%茚三酮溶液中。如有汗液即可在指印处显出点状指纹。
用硝酸溶液浸泡固定,可长期保存。因汗中含有多种氨基酸,遇茚三酮后变为紫色。
通过多次检查对比,可观察神经恢复情况。 6。
反射 根据肌肉瘫痪情况,腱反射消失或减退。 7。
神经近侧断端有假性神经瘤,常有剧烈疼痛和触痛,触痛放散至该神经支配区。 8。
神经干叩击试验(Tinel征) 当神经损伤后或损伤神经修复后,在损伤平面或神经生长所达到的部位,轻叩神经,即发生该神经分布区放射性麻痛,称Tinel征阳性。 二、电生理检查 通过肌电图及诱发电位检查,判断神经损伤范围、程度、吻合后恢复情况及预后。
噻唑蓝(MTT)比色法操作注意事项
噻唑蓝(MTT):四唑盐
1. 原理:
MTT比色法,是一种检测细胞存活和生长的方法.活细胞中脱氢酶能将四唑盐还原成不溶干水的蓝紫色产物,并沉淀在细胞中,而死细胞没有这种功能。二甲亚砜(DMSO)能溶解沉积在细胞中蓝紫色结晶物,溶液颜色深浅与活细胞数成正比。
2. 优点:简单快速、灵敏、经济
3. 缺点:由于MTT经还原所产生的甲瓒产物不溶于水,需被溶解后才能检测。这不仅使工作量增加,也会对实验结果的准确性产生影响,而且溶解甲的有机溶剂对实验者也有损害。
4. 应用:新药筛选、细胞毒牲试验、肿瘤放射敏感性实验等
5. MTT主要有两个用途
1)药物(也包括其他处理方式如放射线照射)对体外培养的细胞毒性的测定;
2) 细胞增殖及细胞活性测定。
6. 比色法操作注意事项
1) 选择适当的细胞接种浓度,保证细胞培养结束时浓度不至于过满。
2) 种板技术:均匀。
3) 实验时应设置调零孔,溶媒孔,加药孔。
调零孔:培养基、MTT、DMSO。(无细胞)
溶媒孔:培养液、MTT、DMSO、细胞、溶酶。
加药孔:培养液、MTT、DMSO、细胞、不同浓度的药物。
(一般5-7个梯度,设3-5个复孔)
4)避免血清干扰:一般选小于10%胎牛血清的培养液进行。
5)边缘效应:周边孔加入PBS。
6)MTT的配置: MTT 0.5克,溶于100 ml的磷酸缓冲液。4℃下避光保存2周。
7)孔板的重复利用(1.做完MTT后用大水流尽量将板冲净,然后用洗衣粉水泡几个小时(小心最好让洗衣粉先化开)。2.用自来水冲净洗衣粉水,倒扣晾
干.3.重铬酸钾加浓硫酸配成的酸液中浸泡过夜泡洗液(六小时以上即可)后自来水洗净(20次左右)每个孔都要处理4.用去离子水冲洗3遍,双蒸水冲洗3
遍,烤干5.超净台中紫外线照射2个小时左右,就可以用了,不可以高压。或泡酸过夜,dd水冲洗干净,烘干或者晾干后紫外照射30min以上即可使用。
8)MTT法只能用来检测细胞相对数和相对活力,但不能测定细胞绝对数。
9)在用酶标仪检测结果的时候,为了保证实验结果的线性,MTT 吸光度最好在0-0.7 范围内。
10)MTT有致癌性,用的时候小心,有条件最好带那种透明的簿膜手套。
11)配成的MTT需要无菌,MTT对菌很敏感;往96孔板加时不避光也没有关系,毕竟时间较短,或者你不放心的时候可以操作台上的照明灯关掉。
求指纹显现方法有哪些?
1人回答
ssofa
高粉答主
2018-12-26
繁杂信息太多,你要学会辨别
关注谢谢你的关注
指纹显现方法有:
一.光学识别技术
借助光学技术采集指纹是历史最久远、使用最广泛的技术。将手指放在光学镜片上,手指在内置光源照射下,用棱镜将其投射在电荷耦合器件(CCD) 上,进而形成脊线(指纹图像中具有一定宽度和走向的纹线)呈黑色、谷线(纹线之间的凹陷部分)呈白色的数字化的、可被指纹设备算法处理的多灰度指纹图像。
二.温差感应式识别技术
它的优点是可在0.1s内获取指纹图像,而且传感器体积和面积最小,即通常所说的滑动式指纹识别仪就是采用该技术。缺点是:受制于温度局限,时间一长,手指和芯片就处于相同的温度了。
三.半导体硅感技术(电容式技术)
半导体电容传感器根据指纹的嵴和峪与半导体电容感应颗粒形成的电容值大小不同,来判断什么位置是嵴什么位置是峪。其工作过程是通过对每个像素点上的电容感应颗粒预先充电到某一参考电压。
如果已做完标线,可以按下列公式进行计算:
注意:将图片放大,看得更清晰。公式中DH即为产物水解度(Degree of hydrolysis,DH), 用于衡量蛋白质的水解程度,定义为蛋白质水解过程中被裂解的肽键数h(mmol/g蛋白质)与给定蛋白质的总肽键数hhot (mmol/g蛋白质)。
补充:
1. 7.8 mmol/g是给定蛋白质即大豆蛋白质的总肽键数,以hhot(hot为h的右下标)表示。
2. 操作与计算:
(1)标准曲线的绘制 (因已做完,故略去)
(2)水解蛋白液中-NH2基的测定(茚三酮法):取水解蛋白液0.50 mL定容至50 mL,取0.40 mL稀释液于试管中并加入1.60 mL蒸馏水、1.00 mL显色剂,混匀后置沸水浴中加热15 min,同时作空白试验。以后操作同标准曲线。利用标准曲线计算水解蛋白液-NH2的含量(μmol/mL)。
(3)水解蛋白液中蛋白质含量的测定:取1.00 mL水解液进行湿法消化处理,然后在蒸馏仪上蒸馏进行人工滴定定氮,蛋白质的含量表示为N*6.25 mg/mL。
(4)结果计算:原料蛋白质中存在游离的-NH2基,在计算时要考虑它的影响,否则计算的DH值偏大。
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