紫外吸收法测蛋白质(估计蛋白质浓度120mg/ml,如何用紫外线法测定蛋白质含量)
1.估计蛋白质浓度120mg/ml,如何用紫外线法测定蛋白质含量
您好！
① 1mg/ml蛋白质浓度OD280约为1。
② OD值在0.2-0.8之间与蛋白浓度线性最好。
③ 因此120mg/ml的浓度，稀释150-600倍之间测试比较合适。
④ 测试蛋白浓度，因考虑核酸的影响，因此应该同时测定OD280及OD260，如果A280/A260>2，此时可以忽略核酸的影响； 如果A280/A260
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2.生物化学实验紫外法测定蛋白质含量中哪些不良操作会对实验结果产生
实验二、紫外分光光度法测定蛋白质含量
【实验目的】
1.掌握紫外分光光度法测定蛋白质含量的原理和方法
2.掌握紫外光分光光度计使用
【实验原理】
蛋白质中含有酪氨酸、色氨酸等氨基酸残基，在紫外光280nm波长处有最大吸收峰，故可用280nm的光吸收值（即光密度的大小）来测定蛋白质的含量。
由于核酸在280nm也有光吸收，对蛋白质的测定有干扰作用。但核酸的最大吸收峰在260nm，如同时测定260nm的光吸收，通过计算可以消除其对蛋白质测定的影响，因此溶液中存在核酸时，必须同时测定280nm和260nm的光密度，方向通过计算测得溶液中的蛋白质浓度。
【实验操作】
1、稀释血清（或其他蛋白质溶液），准确吸取0.1mL血清，置于50mL容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度（即500倍）。
2、测定光密度在紫外分光光度计上，将稀释的蛋白质溶液倒入石英比色杯中，用生理盐水做对照，测得280nm和260nm两个波长的光密度。
【计算】
将测得280nm和260nm波长的光密度值按下列经验公式计算蛋白质浓度。
蛋白质浓度（mg/mL）=1.45D280-0.74D260
【附注】
1、不同的蛋白质和核酸的光吸收率不完全是恒定不变，所以可能产生误差。另外核酸中的嘌呤碱，嘧啶碱在波长260nm和280nm都有光吸收作用。所以核酸的含量在20%以下，D280/D260>1.5时，方可以使用上述公式。
2、本法对于微量蛋白质的测定即快又方便，它还适应于用硫酸铵或其他盐类提纯的蛋白质样品（这种蛋白质样品含多种盐类混杂，用其他方法测定比较困难）。
3、如纯系蛋白质样品，可根据该蛋白质在280nm附近标准吸光系数，直接测定该蛋白质的含量。如牛血清白蛋白的EI280（%)为6.3测定时，按下列公式计算。
样品中牛血清白蛋白浓度（mg/mL）=D280/6.3*10
4、为简便起见，对于混合蛋白质溶液，可用D280乘以0.75来代表其中蛋白质的大致含量（mg/mL）。
3.求 怎样用紫外分光光度法测蛋白质含量
1、280nm的光吸收法
用标准曲线法进行测定。标准蛋白质溶液配制的浓度为1.0 mg/mL。常用的标准蛋白质为牛血清清蛋白（BSA）。
2、280 nm和260 nm的吸收差法
核酸对紫外光有很强的吸收，在280 nm处的吸收比蛋白质强10倍（每克），但核酸在260 nm处的吸收更强，其吸收高峰在260 nm附近。核酸260 nm处的消光系数是280 nm处的2倍；而蛋白质则相反，其280 nm的紫外吸收值大于260 nm的吸收值。
3、215 nm与225 nm的吸收差法
蛋白质的稀溶液由于含量低而不能使用280 nm的光吸收测定时，可用215nm与225 nm吸收值之差，通过标准曲线法来测定蛋白质稀溶液的浓度。
4、肽键测定法
蛋白质溶液在238 nm处的光吸收的强弱，与肽键的多少成正比。因此可以用标准蛋白质溶液配制一系列50~500 mg/mL已知浓度的5.0 mL蛋白质溶液，测定238 nm的光吸收值A238，以A238为纵坐标，蛋白质含量为横坐标，绘制出标准曲线。未知样品的浓度即可由标准曲线求得。
扩展资料：
紫外分光光度法原理
光谱法（spectrometry）是基于物质与电磁辐射作用时，测量由物质内部发生量子化的能级之间的跃迁而产生的发射、吸收或散射辐射的波长和强度进行分析的方法。光谱法可分为发射光谱法、吸收光谱法、散射光谱法；或分为原子光谱法和分子光谱法；或分为能级谱，电子、振动、转动光谱，电子自旋及核自旋谱等。
分光光度法是光谱法的重要组成部分，是通过测定被测物质在特定波长处或一定波长范围内的吸光度或发光强度，对该物质进行定性和定量分析的方法。常用的技术包括紫外-可见分光光度法、红外分光光度法、荧光分光光度法和原子吸收分光光度法等。
紫外-可见分光光度法是在190~800nm波长范围内测定物质的吸光度，用于鉴别、杂质检查和定量测定的方法。
参考资料来源：百度百科-紫外分光光度法
4.紫外吸收法测定蛋白质浓度的基本原理是什么
原理：蛋白质分子中常含有酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸等苯环结构，在紫外280nm波长处有最大吸收峰，其光吸收值与蛋白质浓度成正比，故可以用280nm波长吸收值大小来测定蛋白质含量。
优点：
1. 快速
2. 对蛋白质无破坏性
缺点：
1. 不是严格的定量方法。
因为此法是根据酪氨酸（Tyr）、苯丙氨酸（Phe）、色氨酸（Trp）残基的强吸收值来测定的，不同的蛋白质具有不同的消光系数。 另外，当蛋白质分子中不含Tyr、Phe或Trp残基时，该方法就不能检出蛋白。（此法用于测粗提总蛋白浓度较为适宜）
2. 核酸可引起强烈干扰
