根系活力测定TTC法(TTC法测定根系活力的标准方程,在线等!~)

1.TTC法测定根系活力的标准方程,在线等!~

物根系是活跃的吸收器官和合成器官，根的生长情况和活力水平直接影响地上部的营养状况及产量水平。本实验练习测定根系活力的方法，为植物营养研究提供依据。

一、原理

氯化三苯基四氮唑（TTC）是标准氧化电位为80 mV的氧化还原色素，溶于水中成为无色溶液，但还原后即生成红色而不溶于水的三苯甲 （TTF），如下式：

生成的三苯甲 （TTF）比较稳定，不会被空气中的氧自动氧化，所以TTC被广泛用作酶试验的氢受体，植物根系中脱氢酶所引起的TTC还原，可因加入琥珀酸、延胡索酸、苹果酸得到增强，而被丙二酸、碘乙酸所抑制。所以TTC还原量能表示脱氢酶活性，并作为根系活力的指标。

二、实验材料、试剂与仪器设备

（一）实验材料

水培或砂培小麦、玉米等植物根系。

（二）试剂

1. 乙酸乙酯（分析纯）。

2. 次硫酸钠（Na2S2O4，分析纯），粉末。

3. 1%TTC溶液：准确称取TTC 1.0 g，溶于少量水中，定容到100 mL。用时稀释至需要的浓度。

4. 磷酸缓冲液（1/15 mol/L,pH7.0）。

5. 1 mol/L硫酸：用量筒取比重1.84的浓硫酸55 mL，边搅拌边加入盛有500 mL蒸馏水的烧杯中，冷却后稀释至1000 mL。

6. 0.4 mol/L琥珀酸：称取琥珀酸4.72 g，溶于水中，定容至100 mL即成。

（三）仪器设备

小烧杯3个，研钵1个，移液管：0.5 mL 1支、10 mL 1支、5 mL 3支，刻度试管6支，分光光度计，分析天平（感量0.1 mg），电子顶载天平（感量0.1 g），温箱，试管架，药勺，石英砂适量，滤纸。

三、实验步骤

1. 定性测定

(1)配制反应液 把1% TTC溶液、0.4 mol/L的琥珀酸和磷酸缓冲液按1:5:4比例混合。

(2)把根仔细洗净，把地上部分从茎基部切除。将根放入三角瓶中，倒入反应液，以浸没根为度，置37℃左右暗处放1~3 h，以观察着色情况，新根尖端几毫米以及细侧根都明显地变成红色，表明该处有脱氢酶存在。

2. 定量测定

(1)TTC标准曲线的制作 取0.4% TTC溶液0.2 mL放入大试管中，加9.8 mL乙酸乙酯，再加少许Na2S2O4粉末摇匀，则立即产生红色的TTF。此溶液浓度为每毫升含有TTF 80 µg。分别取此溶液0.25 mL、0.50 mL、1.00 mL、1.50 mL、2.00 mL置10 mL刻度试管中，用乙酸乙酯定容至刻度，即得到含TTF 20 µg、40 µg、80 µg、120 µg、160 µg的系列标准溶液，以乙酸乙酯作参比，在485 nm波长下测定吸光度，绘制标准曲线。

(2)称取根尖样品0.5 g，放入小烧杯中，加入0.4% TTC溶液和磷酸缓冲液（pH7.0）各5 mL，使根充分浸没在溶液内，在37℃下暗保温1~2 h，此后立即加入1 mol/L硫酸2 mL，以停止反应。（与此同时做一空白实验，先加硫酸，再加根样品，37℃下暗保温后不加硫酸，其溶液浓度、操作步骤同上）。

(3)把根取出，用滤纸吸干水分，放入研钵中，加乙酸乙酯3~4 mL，充分研磨，以提出TTF。把红色提取液移入刻度试管，并用少量乙酸乙酯把残渣洗涤2~3次，皆移入刻度试管，最后加乙酸乙酯使总量为10 mL，用分光光度计在波长485 nm下比色，以空白试验作参比测出吸光度，查标准曲线，即可求出TTC还原量。

四、结果计算

根系活力= C/(1000*W*h) [mg TTF/(g•h)]

式中：C——四氮唑还原量，μg。

W——根重，g。

h——时间，h。

2.测定根系活力数据有什么规律

你好，将碑酸级二钠注入土中范围较小的一定部位，一株作物只注入一点，再选择作物的一定部位测其放射性，即可获得作物某一生长时期的根活力。

所侧数据经统计学处理后列表、绘图可得到清晰的根活力分布图、测定时需用小型野升定标器，我们使用的是国产DBX一1定标器，该仪器体积小、重量轻、灵敏度高、数码管显示。使用这种方法和仪器在油菜、水稻上侧定根系活力得到了较满意的结果。

侧定方法：以磷酸氢二钠为指示剂，早田使用N幻H.名PO；不需特殊处理，水田操作时则要将Na:H二PO'用阴离子交换树脂或泥团吸附。 Na:H二PO'用非放射性磷酸盐稀释，每洞注入1 ml左右，渗透范围约1 cm，放射性强度依测定时间长短而定。

每株施入的P:O。量经计算小于每亩施磷量的l%。

标记部位应形成一个立体面。在离植株主茎水平距离5 cm、10cm处的东、西、南、北四个方位的三个深度打洞，。

3.红墨水法和TTC法测定种子活力有什么不同

TTC染的是活细胞，红墨水染的是死细胞。

TTC法：凡有生命活力的种子胚部，在呼吸作用过程中都有氧化还原反应，而无生命活力的种胚则无此反应。当TTC渗入种胚的活细胞内并被还原时，便由无色的TTC变为红色的TTF。

红墨水法：凡生活细胞的原生质膜具有选择性吸收物质的能力，而死的种胚细胞原生质膜丧失这种能力，于是染料便能进入死细胞而染色。

扩展资料

TTC法的原里：

凡有生活力的种子胚部在呼吸作用过程中都有氧化还原反应，而无生活力的种胚则无此反应。

当TTC溶液渗入种胚的活细胞内，并作为氢受体被脱氢辅酶（NADH或NADPH）还原时，可产生红色的三苯基甲（TTF），胚便染成红色。

当种胚生活力下降时，呼吸作用明显减弱，脱氢酶的活性亦大大下降，胚的颜色变化不明显，故可由染色的程度推知种子的生活力强弱。TTC还原反应如下：TTC（无色），TTF（红色）。

参考资料来源：搜狗百科-TTC法