石蜡制片(石蜡切片法的详细过程和注意事项)

1.石蜡切片法的详细过程 和注意事项

在显微镜下观察植物体内部的细微结构之前，必须根据植物材料的特性，采用不同的方法，对植物材料进行处理，把材料制成透明的玻片标本.根据材料的性质和制作法的不同，常用的植物显微制片技术可以分为切片法与非切片法两大类，前者常用的有徒手切片法，冰冻切片法，火棉胶切片法，石蜡切片法，冷冻切片法等，其中以石蜡切片法最为常用.后者包括整体封藏法，涂布法，压片法等.石蜡切片法 石蜡切片法是以石蜡作包埋剂，用旋转切片机将材料切成薄片，经一系列处理制成永久制片的方法.在研究植物的细胞，组织，胚胎以及形态等方面石蜡切片法是最理想的制片方法. 石蜡切片法的一般流程为：取材→固定→抽气→洗涤→脱水→透明→浸蜡→包埋→修块→切片→粘片→染色→封片.取材 用锋利的刀片切取新鲜的植物材料，选定适宜的材料，立即固定.取材的注意事项如下：（1）取材料要新鲜.动作要迅速，以免挤压损坏组织；取病理材料时，应设置对照材料.（2）所取材料大小要适当：根和茎一般直径≤5mm，切取成5-10mm小段；叶片一般取过中脉处，切成2-5mm宽，5-8mm长.在切材料时，必须注意刀片与中轴成直角，两切面平行，否则制成的切片细胞是斜的. 雌，雄蕊一般不需分割.（3）取材时间可根据切片要求有所区别.如：在进行植物发育的研究过程时，需要找到细胞分裂相，一般在晴天的早晨9:00-10:00时取材，此时植物细胞分裂活动较明显.（4）取材不易过老，否则制片有难度（过老的材料须在滑走切片机上进行）；对纵切的材料适当多取材，如根尖，茎尖等，因为切到材料正中的概率较低.（二）固定 将已切好的材料尽快地浸入相当于材料10-15倍体积的固定液中.借助固定液的作用，使细胞的新陈代谢瞬时停止，并保持细胞或组织的形态构造及其内含物的状态不发生变化.从而达到使组织变硬从而便于切片，增强内含物的折光度，令细胞易于着色的目的，同时具有防腐作用.以新鲜配制固定液效果较好.固定的时间依材料的种类，性质，大小等而定.材料固定完毕，保存于加盖的容器内，贴上标签.良好的固定剂，应是穿透力强，使细胞立刻致死，原生质全部凝固；不发生任何变形，增强折光率，并且不妨碍染色. 常用固定液：简单固定液 以一种化学药品配制的固定液.⑴ 乙醇 为凝固型固定剂.常用无水乙醇或95%乙醇.⑵ 甲醛 为非凝固性固定剂.具强烈刺激性气味.纯净的甲醛为无色透明液体.固定用的浓度为4%-10%.⑶ 醋酸 为凝固型固定剂.为无色透明的液体，刺激性极强，低温下凝结成冰，故又名冰醋酸.2. 混合固定液：由几种试剂，适量配制而成.混合遵循原则：① 优缺点互补；② 膨胀与收缩相互平衡；③ 强氧化剂与还原剂应分别配置.常用混合固定液有下列几种：⑴ FAA 固定液（福尔马林-冰醋酸-乙醇） 广泛适用于根，茎，叶，花药，子房的组织切片，所以又称为万能固定液.一般固定时间不低于24 h.该固定液优点是在较低温度下（10℃左右）适用于材料的长期保存，可兼作保存液.并且固定的材料，不妨碍染色，但用于细胞学上的固定效果较差.⑵ 纳瓦兴（Navaschjn's）固定液 1912年首创.适用于细胞学与组织学研究的切片观察.但渗透慢，不能长期保存；主要用于显示分裂相.（三）抽气 植物材料内部多由于含有空气，导致固定液不能完全深入.材料投入固定液后需要立即抽气.以便让固定液有效透入材料组织中，并排除材料内气泡的干扰.一般抽气时间为20-30 min.抽过气的材料在停止抽气，应沉入底部.（四）洗涤 固定液中的成分有可能会妨碍染色或发生沉淀或结晶，影响观察；有的还会继续作用，使材料变质等.因此，在使用材料时，需根据固定液的种类，用水，缓冲液或70%乙醇洗去渗入细胞内部的固定液.如：用FAA固定的材料在脱水时用70%乙醇反复洗涤数次.如用水洗涤，可将材料自固定液中取出，放入指形管，加入半管水，用纱布将管口扎紧，置于水槽内，进行流水冲洗.流水冲洗时间一般为12-24 h. （五）脱水 材料经洗涤后含有部分水分，会使材料分解.而且透明剂与水是不相混合的，不利于材料的透明和包埋等后期处理.因此需用脱水剂逐渐除去材料中的水分，以便让石蜡渗透进细胞.所以，脱水是制片的关键环节.脱水剂要求能与水混合，而且能与其他有机溶剂互相替代.脱水必须在有盖的玻璃器皿中进行，防止吸收空气中的水分；在更换高一级的脱水剂时，最好不要移动材料，以免损坏材料.（六）透明 透明剂要具有既能与脱水剂相混合又能和石蜡相混合的性质，可以将材料中的脱水剂置换出来，使石蜡能顺利进入材料中.二甲苯是目前应用最广的透明剂，作用迅速，但易使材料变脆..（七）浸蜡 是指逐步清除材料中的透明剂，以使石蜡充分渗透于材料内部的过程.这样，材料的各部分都能保持原来的结构与位置，切片不致发生破裂或其他变形.浸蜡是一个渐进的过程，常用的正丁醇.每次浸蜡的时间，视材料大小而调节.（八）包埋 材料经过足够时间的浸蜡后，需包入蜡块，以备切片.操作方法：根据切片材料大小，确定所需纸盒的尺寸，用表面光滑的磅纸预先叠好纸盒.（九）切片 即将包埋好的材料块用切片机切成所需厚度的切片带.（十）贴片 是。

2.做石蜡包埋切片的流程有哪些,需要注意什么呢

过程大致如下： ⑴固定：生物标本脱离机体或培养环境，细胞会发生自溶，腐败分解。

因此，需用固定剂处理，使蛋白质凝固停止濒死或死后变化。凡供永久保存的标本都需经固定处理。

常用的固定剂是甲醛、乙醇等，能使蛋白质凝固。还有由几种试剂配成的固定液，例如Carnoy固定液，由无水酒精、氯仿、冰醋酸配成，固定力更快更强，不含水分，可避免水溶性物质如糖原等在固定过程中损失。

⑵脱水：是将组织细胞所含水分除去。通常用乙醇（Alcohol，酒精），浓度递升到 100%。

此过程还使组织块进一步硬化。 ⑶透明：是用既能溶于纯酒精又能融解石蜡的有机溶剂，将组织中的酒精取代，以便石蜡浸入。

通常用二甲苯（xylene）为透明剂。 ⑷浸蜡：在温箱内进行。

已透明的组织块放入加热融解的石蜡中，让石蜡浸透组织，作为支持介质。 ⑸包埋：将已浸蜡的组织块放入热融的包埋石蜡中，迅速冷凝，组织决便被蜡包埋。

⑹切片：用切片机。常用的切片机有轮转式、平推式的。

用轮转式的易于切出连续切片。切片厚度随制片目的而调整。

教学标本厚度多是5~6μm。 ⑺贴片烤干：石蜡切片在温水上展平后，移在玻片上，烤干，即可供染色处理。

染色后用树胶、盖坡片封固，可永久保存。

3.石蜡治疗有什么注意事项?

石蜡治疗的注意事项如下：（1）石蜡治疗前使治疗区的皮肤保持清洁，如有污秽、汗液应除去，毛发较多时可剃去，有毛发处应涂凡士林。

（2）医用蜡中不应含有水分，以免引起烫伤。若在加热熔化时出现啪啪声和泡沫，则表示有水分。

脱水的方法是将蜡加热至100〜ll0°C，同时不断搅拌，泡沫及啪啪声即消失。 （3）石蜡加热必须采用隔水加热的方法，以免烧焦或燃烧。

注意防火、防烧、烫伤。蜡疗过程中防止发生烫伤。

为防止烫伤，应注意在使用相应蜡型时不能用力挤压，防止中间未凝固的蜡液流出烫伤皮肤；应准确掌握蜡温，同时根据患者对温度耐受的个体差异而调节蜡温，不能强求温度一致，随时听取患者的主诉，感觉太热时应即松开外面固定的绷带，待患者能耐受时再重新固定；所用石蜡中应不含有水分；若皮肤上有破损，可在上面盖一层凡士林纱布后再进行蜡疗。 （4）其次，为保证蜡疗的疗效，制作的相应蜡型应超过所敷患处的范围，且让制作的相应蜡型与患处尽量紧贴，塑好形，不留空隙，这样易于保温。

4.病理学检验技术做快速切片的方法和注意事项?

冰冻切片 是免疫组织化学染色中最常用的一种切片方法。

其最突出的优点是能够较完好地保存多种抗原的免疫活性，尤其是细胞表面抗原更应 采用冰冻切片。新鲜的组织及已固定的组织均可作冰冻切片。

冰冻时，组织中水份易形成冰晶，往往影响抗原定位。 一般认为冰晶少而大时，影响较小，冰晶小而多时，对组织结构损害较大，在含水量较多的组织中上述现象更易发生。

冰晶的大小与其生长速率成正比，而与成核率（形成速率）成反比，即冰晶形成的数量愈多则愈小，对组织结构影响愈严重。因此，应尽量降低冰晶的数量。

Fish认为冰冻开始时，冰晶成核率较慢，以后逐渐增加，其临界温度为-33。C， 从-30。

C降至-43。C之间，成核率急剧增加达1018，然后再减慢。

基于上述理论可采取以下措施减少冰晶的形成。 （1）速冻，使组织温度骤降，缩短从-33。

C43。C的时间，减少冰晶的形成。

其方法有二： ①干冰-丙酮（酒精）法：将150-200ml丙酮（酒精）装入小保温杯内，逐渐加入干冰，直至饱和呈粘稠状，再加干冰不再昌泡时，温度可达-70℃C，用一小烧杯（50-100ml）内装异戊烷约50ml，再将烧杯缓慢置入干冰丙酮（纯酒精）饱和液内，至异戊烷温度达-70℃时即可使用。 将组织（大小为1cm*0。

8cm*0。5cm）投入异戊烷内速冻30-60s后取出，或置恒冷箱内以备切片，或置-80℃低温冰箱内贮存。

②液氮法：将组织块平放于软塑瓶盖或特制小盒内（直径约2cm），如组织块小可适量加OCT包埋剂浸没组织，然后将特制小盒缓缓平放入盛有液氮的小杯内，当盒底部接触液氮时 即开始气化沸腾，此时小盒保持原位切勿浸入液氮中，大约10-20s组织即迅速冰结成块。 取出组织冰块立即置入-80℃冰箱贮存备用，或置入恒冷箱切片机冰冻切片。

（2）将组织置于20%-30%蔗糖溶液1~3天，利用高渗吸收组织中水分，减少组织含水量。 影响冰冻切片的因素较多，因此，技术难度较大，选择好的冰冻切片机是保证切片质量的关键。

目前冰冻切片机有两类： ①恒慢冰冻切片机（Cryastat）：为较理想的冰冻切片机，型号很多，但其基本结构是将切片机置于-30℃C低温密闭室内，故切片时不受外界温度和环境影响，可连续切薄片至2-4μm，完全能满足免疫组织化学标记要求。 切片时，低温室内温度以-15℃~18℃为宜，温度过低组织易破碎，抗卷板的位置及角度要适当，载玻片附贴组织切片，切勿上下移动。

②开放式冰冻切片机：包括半导体致冷切片机和甲醇致冷切片以及老式的CO2、氯乙烷等冷冻切片机。切片时暴露空气中，温度不易控制，切片技术难度 大，在高温季节 ，切片更加困难，且切片厚8~15μm，不易连续切片，但其优点是价廉，国内有生产。

冰冻切片后如不染色，必须吹干，贮存低温冰箱内， 或进行短暂预固定后贮存冰箱保存 石蜡切片 其优点是组织结构保存良好，在病理和回顾性研究中有较大的实用价值，能切连续薄片，组织结构清晰，抗原定位准确。 用于免疫组化技术的石蜡切片制备与常规制片略有不同：①脱水、透明等过程应在4℃。

C下进行，以尽量减少组织抗原的损失。②组织块大小应限于2cm*1。

5cm*0。2cm，使组织充分脱水、透明、浸蜡。

③浸蜡、包埋过程中，石蜡应保持在60℃以下，以溶点低的软蜡最好（即低温石蜡包埋）。 以上全过程为18-24h，也可在室温内使用自动脱水机代替。

如组织块小， 直径小于0。5cm，可用快速石蜡包埋切片，全过程只需4h左右。

石蜡切片为常规制片技术，切片机多为轮转式，切片厚度2~7μm，应用范围广，不影响抗体的穿透性，染色均匀一致。 由于甲醛固定、有机熔剂和包埋剂对组抗原有一定的损害及遮蔽，使抗原特征发生改变。

有人报告经蛋白酶消化，可以改善光镜免疫组化染色强度，常用的有胰蛋白酶、链霉蛋白酶及胃蛋白酶等消化法。石蜡切片应入37℃恒温箱过夜，这样烤片可减少染色中脱片现象。

切片如需长期贮存，可存放于4℃冰箱内备用。 石蜡切片优点较多，但在制片过程中要经过酒精、二甲苯等有机溶剂处理，组织内抗原活性失去较多，有人采用冷冻干燥包埋法（Freeze drying embedding methed），可以保存组织内可溶性物质，防止蛋白变性和酶的失活，从而减少了抗原的丢失。

该法是将新鲜组织低温速冻，利用冷冻干燥机（Freezing dryer）在真空、低温条件下排除组织内水分 ，然后用甲醛蒸气固定干燥的组织，最后将组织浸蜡、包埋、切片。此法可用于免疫荧光标记、免疫酶标记及放射自显影。

振动切片 用振动切片机（Vibratotme），可以把新鲜组织（不固定不冰冻）切成厚片20~100μm，以漂浮法在反应板进行免疫组织化学染色，然后在解剖显微镜下检出免疫反应阳性部位，修整组织进行后固定，最后按电镜样品制备、脱水、包埋、超薄切片、染色观察等。 组织不冰冻，无冰晶形成和组织抗原破坏，在免疫组化染色前避免了组织脱水、透明、包埋等步骤对抗原的损害，能较好地保留组织内脂溶性物质和细胞膜抗原，主要用于显示神经系统抗原分布研究。

这种包埋前染色，尤其实用于免疫电镜观察。 塑料切片 塑料包埋切片常用包埋剂有甲基丙烯酸盐类（Glycol 。

5.固体石蜡如何分等级

石蜡是石油加工产品的一种。

固体烷烃的混合物。无臭无味、白色或淡黄色固体。

由天然石油和人造的含蜡馏分用冷榨或溶剂脱蜡、发汗等方法制得。用于制高级脂肪酸、高级醇、火柴、蜡烛、防水剂、软膏、电绝缘材料等。

[1] 石蜡[2]是矿物蜡的一种，也是石油蜡的一种；它是从原油蒸馏所得的润滑油馏分经溶剂精制、溶剂脱蜡或经蜡冷冻结晶、压榨脱蜡制得蜡膏，再经溶剂脱油、精制而得的片状或针状结晶。又称晶形蜡，碳原子数约为18~ 30的烃类混合物，主要组分为直链烷烃（约为80%~95%），还有少量带个别支链的烷烃和带长侧链的单环环烷烃（两者合计含量20%以下）。

主要质量指标为熔点和含油量，前者表示耐温能力，后者表示纯度。其中以前二者用途较广，主要用作食品及其他商品（如蜡纸、蜡笔、蜡烛、复写纸）的组分及包装材料，烘烤容器的涂敷料、化妆品原料，用于水果保鲜、提高橡胶抗老化性和增加柔韧性、电器元件绝缘、精密铸造等方面，也可用于氧化生成合成脂肪酸。

注：石蜡是非晶体！ 2化学性质编辑 化学中，石蜡是固态高级烷烃混合物的俗名，分子式为CnH2n+2，其中n=20-40。石蜡不与常见的化学试剂反应，但可以燃烧。

3物理性质编辑 石蜡又称晶形蜡，通常是白色、无色无味的蜡状固体，在47°C-64°C熔化，密度约0.9g/cm3。它不溶于水，但可溶于醚、苯和某些酯中。

纯石蜡是很好的绝缘体，其电阻率为1013-1017欧姆·米[2]，比除某些塑料（尤其是特富龙）外的大多数材料都要高。石蜡也是很好的储热材料，其比热容为2.14–2.9J·g–1·K–1，熔化热为200–220J·g–1。

石蜡是蜡烛的主要成分。 4元素符号编辑 关于石蜡的化学元素符号有几种说法，一种说法是石蜡的的主要成分是C（碳）、H（氢）两种元素的物质混合而成。

（可能含有氧元素，但这不主要）其化学元素符号为CxHy。另种说法是石蜡是几种高级烷烃的混合物，主要是正二十二烷（C22H46）和正二十八烷（C28H58），含碳元素约85%，含氢元素约14%.没有单一的化学元素符号。

5性能指标编辑 石蜡的主要性能指标是熔点、含油量和安定性。[3] 熔点 石 蜡是烃类的混合物，因此它并不像纯化合物那样具有严格的熔点。

所谓石蜡的熔点、是指在规定的条件下，冷却熔化了的石蜡试样，当冷却曲线上第一次出现停滞期 的温度。各种蜡制品都对石蜡要求有良好的耐温性能，即在特定温度r.不熔化或软化变形。

按照使用条件、使用的地区和季节以及使用环境的差异，要求商品石蜡 具有一系列不同的熔点。 影响石蜡熔点的主要因素是所选用原料馏分的轻重，从较重馏分脱出的石蜡的熔点较高。

此外，含油量对石蜡的熔点也有很大的影响，石蜡中含油越多，则其熔点就越低。 含油量 含油量是指石蜡中所含低熔点烃类的量。

含油量过高会影响石蜡的色度和储存的安定性，还会使它的硬度降低。所以从减压馏分中脱出的含油蜡膏，还需用发汗法或溶剂法进行脱油，以降低其含油量。

但大部分石蜡制品中需要含有少量的油，这对改善制品的光泽和脱模性能是有利的。 安定性 石蜡制品在造型或涂敷过程中，长期处于热熔状态，并与空气接触，假如安定性不好，就容易氧化变质、颜色变深，甚至发出臭味。

此外，使用时处于光照条件下石蜡也会变黄。因此，要求石蜡具有良好的热安定性、氧化安定性和光安定性。

影响石蜡安定性的上要因素是其所含有的微量的非烃化合物和稠环芳烃。为提高石蜡的安定性，就需要对石蜡进行深度精制，以脱除这些杂质。

6石蜡分类编辑 根据加工精制程度不同，可分为全精炼石蜡、半精炼石蜡和粗石蜡3种。每类蜡又按熔点，一般每隔2℃，分成不同的品种，如52,54,56,58等牌号。

粗石蜡含油量较高，主要用于制造火柴、纤维板、篷帆布等。 石蜡 主要成分为直链烷烃，并含有少量的支链烷烃。

直链烷烃含量从75%到接近100%不等。每一特定的品种大约是由8-15个不同碳数的烷烃所组成。

石蜡是一种白色团体，溶于汽油、二硫化碳、二甲苯、乙醚、苯、氯仿、四氯化碳、石脑油等一类非极性溶剂，不溶于如水和甲醇等极性溶剂。 微晶石蜡 微晶石蜡主要是出文链烃、环烷烃和一些直链烃组成，分子量范围大约是500-1000。

这是一种比较细小的晶体，溶于非极性溶剂，不溶于极性格剂。 液体石蜡 液体石蜡的种类很多，其润滑效果也各不相同。

在挤出加工中初期润滑效果良好，热稳定性也较好。但因相溶性差，用量过多时制品易发粘。

聚乙烯蜡 （简称ACPE） 聚乙烯蜡指分子量为1500-25000的低分子量聚乙烯或部分氧化的低分子量聚乙烯。其呈颗粒状、白色粉末、块状以及乳白色蜡状。

具有优良的流动性、电性能、脱模性。 半精炼石蜡 为颗粒状白色固体.其相对密度随熔点的上升而增加.产品化学稳定性好，含油量适中，具有良好的防潮和绝缘性能，可塑性好.半精炼石蜡生产的蜡烛火焰集中，无烟，不流泪. 用于蜡烛，蜡笔，蜡纸，一般电讯器材以及短路及轻工，化工原料。

7切片制作编辑 石 蜡切片以石蜡制作的切片，可以制成极薄的切片。一般的切片厚度要求在4—6微米。

而石蜡切片不但可以达到这个要求，甚至可以切得更薄到2微米以。