细菌的鉴定通过分离培养获得的病原菌,必须达到不含有其他微生物的纯培养程度,才能进行系统鉴定。
系统鉴定就是通过病原菌的形态结构、生长特性、抗原性和病原性等检测,并用已知标准免疫血清确定分离细菌的属、种和型。微生物鉴定的程序通常是根据其形态,生长、生化特性等定种,最后根据抗原的免疫血清学检查定型。
(一)形态学检查 各种细菌的形态,在适宜的环境下是相对稳定的。但环境的改变,如培养基条件的改变,抗生素和化学药品的作用等,均可使细菌产生不规则的形态,并可出现细胞壁的缺陷和多样性。
为此,在作细菌形态鉴定时,必须按被检菌的生长要求,选择适宜的培养基和培养条件,以及适宜的培养时间和检查方法,才能作出正确的形态学鉴定。形态学检查一般包括二方面:肉眼观察和显微镜检查。
1.肉眼观察 肉眼观察主要观察细菌在固体、液体、半固体,鉴别培养基上的生长情况。在固体培养基上要观察菌落形态、大小、颜色是否均匀一致,表面是光滑湿润,还是干燥无光或呈皱纹状,边缘是整齐还是不规则,菌落是隆起、扁平,还是乳头样,是透明、半透明或不透明。
在液体培养基中,要观察培养基是否呈均匀浑浊,管底有无沉淀,液面有无菌膜,是否产气等。在半固体培养基上应观察细菌是否沿着接种线生长,是呈毛刷样生长还是均匀生长,上下生长是否一致。
在鉴别培养基上,应观察其生长情况是否与预期的相一致,在血琼脂培养基上还要观察是否溶血及溶血圈的特点,在某些培养基上还要注意是否有臭味等。2.显微镜观察 在作细菌个体形态学检查时,要根据被检菌的种类和检查项目,选用相应的染色方法,同时要注意选择适合的培养基以及细菌培养的时间,才能达到预期的目的。
一般以18-24小时(生长时间长的细菌除外)的幼嫩培养菌为宜。例如,作革兰氏染色检查时,培养时间长的陈旧细菌,可能由阳性变为阴性。
作细菌运动性检查时,液体培养基的幼嫩培养物(几小时到十几小时)最为适宜。作炭疽荚膜染色时,因炭疽杆菌在一般培养基上不形成荚膜,而在动物体内形成明显的荚膜,因此,应先接种小鼠,取死亡动物的病料作涂片标本镜检。
作鞭毛染色时,以液体培养基为宜。芽胞的形成,因细菌种类不同,往往对培养条件如培养基、空气和培养时间等而异,但一般均要求较长时间。
镜检时除注意其基本形态结构和大小(要用测微计测量)外,还应注意其排列状态、菌端形状、有无两极染色、有无形成芽胞和荚胞等。必要时可用电镜观察其微细结构。
3.常用的几种染色方法 涂片用的载玻片需用清洁液洗净、擦干、不留油质,否则培养物不能均匀地推开。被检材料如果是肉汤培养物,用铂金耳环取一滴,均匀涂抹于载玻片上,涂抹的范围约有手指甲大即可。
随后,在酒精灯火焰上加热使之固定(即火焰固定);被检材料如果是固体培养物,先滴一滴水(常用生理盐水)于载玻片上,用铂金耳环取少许培养物,在水滴中混匀,培养物不宜太多,菌体看不清楚。脓汁、淋巴液、乳汁也按同样方法制备抹片。
血液和病变组织,直接涂抹在载玻片上,组织抹片也不能太厚,否则看不见细菌,细菌培养物抹片用火焰固定,组织抹片常用甲醇或甲醛固定。
虽说细胞壁是细菌细胞的一般构造,但在特殊情况下也可发现有几种细胞壁缺损的或无细胞壁的细菌存在:①原生质体(protoplast):指在人工条件下用溶菌酶除尽原有细胞壁或用青霉素抑制细胞壁的合成后,所留下的仅由细胞膜包裹着的脆弱细胞,一般由革兰氏阳性菌形成;②球状体或原生质球(sphaeroplast):指还残留部分细胞壁的原生质体,一般由革兰氏阴性细菌所形成;③L型细菌:1935年时,在英国李斯德预防医学研究所中发现一种由自发突变而形成的细胞壁缺损的细菌——(念珠状链杆菌),它的细胞膨大,对渗透压十分敏感,在固体培养基表面形成“油煎蛋”似的小菌落。
由于李斯德(Lister)研究所的第一字母是“L”,故称L型细菌。许多革兰氏阳性和阴性细菌都可形成L型。
目前L型细菌的概念有时用得较杂,甚至还把原生质体或球状体也包括在内。狭义地说,L型细菌应专指那些在实验室中通过自发突变而形成的遗传性稳定的细胞壁缺陷菌株。
一、用脏手上的细菌制装片:
1、收集手上细菌,用少量无菌水(可用冷开水代替)冲洗脏手,让洗手的水流到培养皿中。这些脏水就是细菌培养液。
2、制取细菌装片,取甲、乙两块洁净的载玻片,分别在两玻片的中央各滴一小滴细菌培养液;然后在甲片上盖好盖玻片后直接用600倍的显微镜观察。
(用稍偏暗的视野,调节到位可以看到多种细菌和其它微生物。很容易看到活动的微生物,这样对儿童更有吸引力和教育意义。)如果你想进一步放大并会操作,选定观察的物象后,可把此物象移到视野正中央,再转换更高倍数的镜头观察即可。
3、在乙片的细菌培养液滴上滴一小滴龙胆紫染色液,用牙签将细菌培养液和龙胆紫液搅匀、并将液滴推开,再用酒精灯加热液滴(约5秒钟)后让它自然晾干(约5分钟)。
再用600倍的显微镜直接观察,既可以看到染成深蓝色的多种细菌和其它微生物。不过此时看到的微生物都已死亡、并被固定,因此看不到它们的活动状态。
二、制取洗手后的对照装片。
1、洗手-----将手用香皂洗干净,用洁净的干毛巾揩干手;
2、收集细菌培养液-------用少量无菌水冲洗双手,让洗手液流入洁净的培养皿中;
3、制细菌装片-----制片过程与以上装片过程相同,参照制片即可。
扩展资料:
细菌的基本形态与大小
(1)球菌:
球菌是外形呈圆球形或椭圆形的细菌,直径0.5~1微米,有以下几种类型:
①单球菌:单独存在,如尿素小球菌;②双球菌:如肺炎双球菌;
③链球菌:如乳酸链球菌;④四联球菌:形成的4个细胞排列在一起,成田字,如四联球菌;
⑤八叠球菌:如尿素生孢八叠球菌;⑥葡萄球菌:如金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)。
(2)杆菌:
外形为杆状的细菌称杆菌,常有长宽接近的短杆或球杆状菌,如甲烷短杆菌属(Methano—brevibacter);
长宽相差较大的棒杆状或长杆状菌,如枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)、梭状杆菌(Bacteriumfusiformis);
分枝状或叉状菌,如双歧杆菌属(Bifidobacterium);竹节状(两端平截),如炭疽芽孢杆菌(Bacillusanthracis)等。
按杆菌细胞的排列方式不同则有成对的双杆菌、呈链状的链杆菌,另外,常有栅状、“八”字状以及由鞘衣包裹在一起的丝状等多种。典型的杆菌有大肠杆菌、枯草杆菌、链杆菌、变形杆菌[2]。
(3)螺旋状:
螺旋状的细菌称螺旋菌,一般长5~50微米,宽0.5~5微米,根据菌体的弯曲可分为:
①弧菌(Vibrio):螺旋不足一环者呈香蕉状或逗点状,如霍乱弧菌(Vibriocholerae);②螺菌(Spirillum):满2~6环的小型、坚硬的螺旋状细菌,如小螺菌(Spirillumminor);
③螺旋体(Spirochaeta):旋转周数多(通常超过6环)、体长而柔软的螺旋状细菌,如梅毒螺旋体(TreponemaPallidum)。
参考资料来源:百度百科-细菌
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