二、红细胞标本问题 未加入抗体或血清 实验温度(37℃凝集会下降) 未识别溶血 血清与红细胞比例不当 离心速度、时间不够 使用失效或错误试剂 实验结果记录、解释错误 离心速度过大、时间过长 使用了受到细菌污染的试剂 试验器皿不干净 实验结果记录、解释错误 患者近期接受了大量ABO血型相容但不同型的红细胞,如骨髓移植患者,或非O型人接受O型红细胞 某些ABO基因变异的个体或ABO亚型红细胞,一些白血病或其他恶性疾病患者的红细胞ABO抗原太弱,应用抗-A、抗-B试剂未能出现预期的凝集反应 红细胞获得性或遗传性的异常,如获得性B抗原红细胞或Tn/T多凝集红细胞,人血清抗-A、抗-B试剂可能与这些异常的红细胞反应 使用未洗涤的红细胞标本,其表面黏附的血浆或血清中含针对抗-A、抗-B试剂中染色剂或其他成分的抗体,出现假阳性反应 患者血清中高活性、高浓度冷自身抗体严重致敏(包被)自身红细胞,以至自发地发生凝集,而不是抗体试剂的特异性免疫反应所致 红细胞表面包被IgG类抗体 三、血清标本的问题 小的纤维蛋白凝集的红细胞凝块被误认为是血液凝集,如使用血浆标本或未完全去除纤维蛋白的血清标本时。
免疫抑制疾病患者血清中ABO抗体减少或消失。老年人ABO抗体减弱 4-6月龄内婴儿血清中ABO抗体阴性或很弱,一般只测正定 血清中不正常浓度和比例的蛋白质成分或高分子蛋白增多可引起非特异凝集,如缗钱状红细胞的非特异凝集。
血清中含抗-A、抗-B以外的其他红细胞抗体,如抗-M、抗-I等。 患者接受了ABO血型不同的骨髓移植 患者血清中含有针对红细胞保护剂的抗体 大量C 1分子由于异常高效价的补体结合抗体抗-A、抗-B作用,结合到红细胞膜上,遮蔽了A、B抗原位点,不发生凝集 四、分析和处理 1.重新采集标本,以避免采集、标记、污染等错误 2.查询患者既往病史、输血史、用药史、骨髓移植史 3.彻底洗涤标本或试剂红细胞 4.应用抗-AB、抗-A1、或抗-H检测红细胞 5.分析抗筛结果,确定结果是否受同种异型或自身冷抗体干扰 6.室温孵育30min后,离心观察结果,以检测弱的抗原抗体反应 7. 做自身红细胞做对照,以确定自身抗体的干扰 意外的血清学反应所致的ABO正反定不符 抗体太弱或消失 非正常高浓度的抗-A、抗-B可引起前带现象 A2、A2B或其他ABO亚型人血清中可能有抗-A1 患者血浆蛋白浓度过高或静脉输用了大量大分子药物等原因,可发生类似凝集现象,如缗钱状凝集 冷自身抗体,如抗-I、抗-IH、抗-IA等 自身免疫性温型抗体 同种抗体/意外抗体 五、ABO正反定不符及其处理 1.抗体太弱或消失 如新生儿、老年人、免疫抑制患者,应注意患者的年龄和诊断 2.非正常高浓度的抗-A、抗-B可引起前带现象,导致假阴性,将血清稀释或用EDTA(2.5%)处理可消除 3.A2、A2B或其他ABO亚型人血清中可能有抗-A1, 抗-A1只凝集A1型红细胞而不凝集A2、O型红细胞 4.患者血浆蛋白浓度过高或静脉输用了大量大分子药物等原因,可发生类似凝集现象,如缗钱状凝集 将血清用生理盐水稀释3倍或用盐水替换技术可消除 5.冷自身抗体,如抗-I、抗-IH、抗-IA等(自凝) a.所有试剂及细胞37℃孵育,37℃下判读结果 b.将冷自身抗体吸收 c.将血清用0.01mol/L DTT处理和再定型 6.自身免疫性温型抗体 自身免疫性溶血性贫血病人血清中可有温型自身抗体,37℃反应比室温强 血清能凝集自身和其他各型红细胞,若红细胞上吸附自这种自身抗体,在自身或他人血清中均可出现凝集,正定被误认为AB型,反定被误认为O型。
用递增温度(22℃,37℃,45℃)洗涤红细胞后再做血型鉴定 7.同种抗体/意外抗体 室温下抗-P、抗-M、抗E等,可能出现意外反应,干扰ABO血型鉴定 抗体特异性抗体鉴定,选择抗原阴性的红细胞做反定。
这个问题由武汉新启迪生物来为您解答。做ELISA实验,在处理样本前应该先了解收集样本的注意事项。【标本收集注意事项】
收集血液的试管应为一次性的无热原,无内毒素试管。
2.血清和血浆避免使用溶血,高血脂标本。
3.标本应清澈透明,悬浮物应离心去除。
4.标本收集后若不及时检测,需按一次使用量分装,冻存于-20℃,-80℃电冰箱内,避免反复冻融。
5.可根据标本的实际情况,做适当倍数稀释(建议做预实验,以确定稀释倍数) 。
6.收集标本,尽量做到双份的用量,避免一次实验失败,重复实验时标本缺失,从而耽误实验进程。
7.收集标本时,应该做好防护措施(比如戴手套,口罩,护目镜等),认为所有标本都具有一定的潜在危险性。
8.样本处理应该在生物安全柜里面,并且正确使用生物安全柜。</ol>;样本正确的处理方法应该是这样的:
【标本处理办法】
血清:将采集的全血静置冰箱4℃过夜,然后1000-3000rpm离心10分钟,取上清立即测试,暂时不测可以放入-20℃(1-3个月)或-80℃(3-6个月)保存。
2.血浆:用EDTA,枸橼酸钠,肝素等作为抗凝剂,加入血液混匀后,1000-3000rpm离
心10分钟,取上清立即测试,暂时不测可以放入-20℃(1-3个月)或-80℃(3-6个月)
保存。
3.组织匀浆:切取组织块,0.01MPBS中过洗一次;按照1G组织加入5-10ml组织蛋白萃取试剂的比例,在冰水中匀浆。匀浆完成后,5000-10000rpm离心10分钟,取上清立即测试,暂时不测可以放入-20℃(1-3个月)或-80℃(3-6个月)保存。
4.细胞培养上清:1000-3000rpm离心10分钟,取上清立即测试,暂时不测可以放入-20℃(1-3个月)或-80℃(3-6个月)保存。
5.尿液,腹水,脑脊液等:1000-3000rpm离心10分钟,取上清立即测试,暂时不测可以放入-20℃(1-3个月)或-80℃3-6个月)保存。</ol>;注:样品稀释的一般原则
用户须查阅相关文献了解标本内待测因子的含量,决定适当的稀释倍数,以使稀释后样品中待测因子的浓度处于ELISA试剂盒的最佳检测范围。样品的稀释应有详细记录。希望可以给您提供帮助,祝您科研顺利!
血流感染是一种严重的全身感染性疾病,早期快速诊断并及时治疗对患者预后至关重要。
血培养是目前诊断血流感染最直接和最可靠的方法,血培养标本质量的好坏直接影响诊断的准确性,故在血液标本采集过程中应掌握如下要点。(1) 采血时机:尽可能在患者寒战开始时,发热高峰前30~60分钟内采血;在使用抗菌药物治疗前采集血液标本,如患者已经使用抗菌药物治疗,应在下一次用药之前采集血标本。
临床往往存在经验性用药后病情未得到缓解时才会考虑血培养,但是由于已经应用了广谱抗菌药物,细菌大多被杀灭或抑制,血培养结果往往为“无细菌生长”,因此,掌握正确的采血时机至关重要。(2) 采血部位:通常为肘静脉。
切忌在静滴抗菌药物的静脉处采血;不应从留置静脉或动脉导管内取血,除非怀疑有导管相关的血流感染,因为导管常伴有定植菌存在。 (3) 采血工具:建议采用商业化的真空血培养瓶。
如果血培养瓶的储存温度为 2~8丈,应先将血培养瓶在室温放置30分钟左右,平衡至室温再采血。同一部位采集两瓶血培养时不建议更换针头。
(4) 采血次数、血培养瓶的选择:对于成人患者,应同时分别在两个部位采集血标本;每个部位需氧和厌氧培养各一瓶。 对于儿童患者,应同时分别在两个部位采集血标本,分别注人儿童瓶,一般不需要厌氧瓶,除非怀疑患儿存在厌氧菌血流感染。
(5) 采血量:成人每次每培养瓶应采血5~10ml(合计20~40 ml);婴幼儿根据患儿的体重确定采血总量,每培养瓶(儿童瓶)采血2~4 ml。 采血量是影响血培养检出阳性率的重要因素,采血量过少会明显降低血培养阳性率。
国内大多数医疗机构不能完全做到双侧部位采血、留取双套血液标本,这不利于血培养阳性率的提高。(6) 皮肤、血培养瓶消毒:为减少皮肤、培养瓶口等对血培养造成的污染,在穿刺前,应对皮肤和培养瓶口进行消毒并充分干燥,以减少假阳性的发生概率。
(7) 避免采血管内空气注人厌氧血培养瓶。(8) 避免在静脉留置导管连接处(如肝素帽处)采集血标本。
避免标本污染。
这个问题由武汉新启迪生物来为您解答。
做ELISA实验,在处理样本前应该先了解收集样本的注意事项。 【标本收集注意事项】 收集血液的试管应为一次性的无热原,无内毒素试管。
2.血清和血浆避免使用溶血,高血脂标本。 3.标本应清澈透明,悬浮物应离心去除。
4.标本收集后若不及时检测,需按一次使用量分装,冻存于-20℃,-80℃电冰箱内,避免反复冻融。 5.可根据标本的实际情况,做适当倍数稀释(建议做预实验,以确定稀释倍数) 。
6.收集标本,尽量做到双份的用量,避免一次实验失败,重复实验时标本缺失,从而耽误实验进程。7.收集标本时,应该做好防护措施(比如戴手套,口罩,护目镜等),认为所有标本都具有一定的潜在危险性。
8.样本处理应该在生物安全柜里面,并且正确使用生物安全柜。样本正确的处理方法应该是这样的: 【标本处理办法】 血清:将采集的全血静置冰箱4℃过夜,然后1000-3000rpm离心10分钟,取上清立即测试,暂时不测可以放入-20℃(1-3个月)或-80℃(3-6个月)保存。
2.血浆:用EDTA,枸橼酸钠,肝素等作为抗凝剂,加入血液混匀后,1000-3000rpm离心10分钟,取上清立即测试,暂时不测可以放入-20℃(1-3个月)或-80℃(3-6个月)保存。3.组织匀浆:切取组织块,0.01MPBS中过洗一次;按照1G组织加入5-10ml组织蛋白萃取试剂的比例,在冰水中匀浆。
匀浆完成后,5000-10000rpm离心10分钟,取上清立即测试,暂时不测可以放入-20℃(1-3个月)或-80℃(3-6个月)保存。4.细胞培养上清:1000-3000rpm离心10分钟,取上清立即测试,暂时不测可以放入-20℃(1-3个月)或-80℃(3-6个月)保存。
5.尿液,腹水,脑脊液等:1000-3000rpm离心10分钟,取上清立即测试,暂时不测可以放入-20℃(1-3个月)或-80℃3-6个月)保存。注:样品稀释的一般原则 用户须查阅相关文献了解标本内待测因子的含量,决定适当的稀释倍数,以使稀释后样品中待测因子的浓度处于ELISA试剂盒的最佳检测范围。
样品的稀释应有详细记录。 希望可以给您提供帮助,祝您科研顺利。
采血过程注意事项
采血而要注意的问题包括:采血部位、采血时患者的体位、止血带的影响、输液的影响、抗凝剂的种类和量的影响。
1.采血部位
不同采血部位采集的血标本,会检测出不同的结果。同一患者同一项目,今天从手指采集血样,明天从静脉采集血样,是不合理的。从同一患者手指、静脉采集的血标本用于血常规,结果就不一样。
2.止血带的影响
止血带压迫时间40秒,总蛋白增加4%、天门冬氨酸转移酶(AST)增加16%;超过3分钟,局部血液浓缩,血清铁,血清钙、酸性磷酸酶(ACP)、血钾升高,乳酸升高,PH值减低。
3.患者体位
患者在卧位、坐位、立们不同姿势,护士采集的标本,检验结果不同时。正常人立位血浆总量比卧位减少12%左右,引起红蛋白(Hb)、白细胞(WBC)、红细胞(RBC)、红细胞比容(HCT)、脂类、蛋白等值变化。止血时间过长会引起凝血系统变化,反复攥拳会使血钾升高。
采血操作步骤
1. 让病人坐直或平躺,保持合适的体位,利于护士操作为宜且充分暴露采血部位。
2. 让病人衣着应宽松,袖口不宜过紧,以免采血后血管仍然充血引起出血或皮下血肿。
3. 记得要叮嘱患者“按压针眼处5-10分钟”,避免血肿引起医患纠纷。
4. 避免在患皮肤病、皮肤损伤的部位或有瘢痕的部位抽血,以免引起感染。
注意事项
1. 严格无菌操作技术,彻底消毒皮肤,消毒范围8~10cm,消毒后手指不得触摸穿刺部位,采血过程中采血者须经常用乙醇棉球或0.2%过氧乙酸液浸泡的毛巾擦拭双手,尽量保持手指无菌。
2. 采血时血流不畅应注意查找原因:
①针头在静脉内位置不当,针头斜面被静脉壁或瓣阻挡;
②穿刺过深或针头斜面未全部进入静脉内;
③采血导管被挤压粘连或弯曲变形;
④止血带压力不足或过高,造成表浅静脉不充盈或深部静脉回流受阻;
⑤献血者精神紧张,出现献血反应,造成静脉痉挛或塌陷。针对上述原因作及时处理,保持血流通畅。
3. 认真核对袋签、管签上的编号、姓名和血型是否一致,如有标签脱落,须从血袋内重新抽血样复查肝功及血型,结果一致后方可送出。
采血
释义:
因检验或相关需要,由医务人员经静脉、动脉采取血液标本的过程。
方法:
采血由医护人员并经专门采血技术培训的人员来承担,未经专门培训不得上岗;采血技术的熟练程度,直接关系到血液的质量和献血者的身体健康,所以要求每位采血人员必须熟练掌握采血技术。
献血者的护理
①献血后,敷盖在针眼上的棉球、胶布须保留4h以上,以免针眼感染。
②检查穿刺部位有无渗血或出血,若有出血应抬高手臂,并继续压迫局部。
献血者的选择
①年龄 男18~55岁,女18~50岁。超过此年龄者,如果本人自愿、单位同意、体检合格、经医师审定后,男女各可放宽5岁。
②身体健康,无下列病史 病毒性肝炎 (甲型肝炎痊愈1年,经3次化验血阴性者可献血)、疟疾(停止治疗后3年并无疟疾症状者可献血)、血吸虫病(1年前患过血吸虫病,已痊愈,无肝、脾肿大,又无临床症状者可献血)、肺结核病(已治愈,不再有活动性2年之后,可献血)、性病史或梅毒抗体阳性、艾滋病史或HIV抗体阳性、恶性肿瘤、重度变态反应病、精神失常、经常头痛或晕厥、心脑血管疾病、肝肾、血液、内分泌代谢疾病,接受主要脏器切除治疗及其他重要病史。
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