物理消毒就是利用物理的作用(包括光、热、蒸汽、压力等)以杀灭病原体。
在养蚕生产中应用较广泛的物理消毒法有蒸汽消毒、煮沸消毒及日光消毒等。
(1)蒸汽消毒及蒸煮消毒
消毒方法与作用原理:湿热条件下利用高温(100℃)使病原蛋白质变性、凝固而失去致病力。消毒对象及使用范围:蒸汽消毒时加入少量的甲醛效果更好。蚕网、蚕蔟等零星的小蚕具可通过蒸煮消毒。
(2)日光消毒
作用原理:利用日光中的紫外线来杀菌。紫外线是一种波长0.32~0.40微米左右的短波光线,杀菌力强。紫外线照射后引起核酸、蛋白质变性而失去致病力,此外,日光的红外线有热辐射作用,使病原微生物表面发热干燥,能起到一定的辅助消毒作用。日光消毒的效果与物体表面温度的高低关系很大,如温度越高则照射的时间可适当缩短。
消毒对象及使用范围:日光消毒的对象比较广泛,对各种病原微生物都有杀灭的作用。但由于只能消毒表面层,不能深入内部,且受大气的影响较大,日照的强度亦无法掌握。因此,只能作为蚕具的辅助消毒。在日光消毒时要注意做到将蚕具摊平,使之充分曝晒于直射日光之下,并要经常调换正反面或多晒几次。
进行消毒与灭菌的常用物理方法包括热力、过滤、渗透压、干燥、微波、辐射等。
(1) 热力灭菌热力灭菌是利用髙于微生物能够忍耐的最高温度,来破坏微生物细胞内蛋白质和核酸的氢键,使蛋白质变性,酶失去活性,生化反应停止,渗透交换等新陈代谢发生障碍或消失,导致细菌细胞死亡。 热力灭菌有干热灭菌和湿热灭菌之分。
① 干热灭菌采用灼烧或干热空气灭菌的方法。适用于玻璃器皿和瓷器等物的灭菌,广泛应用于实验室和生产。
a。 灼烧灭菌即通过火焰高温灼烧进行灭菌的方法,其特点是灭菌迅速,简便彻底,适用于需烧毁或耐热的物品。
如接种工具、试管口和玻璃瓶口,通过火焰灼烧而灭菌,一般用酒精灯或酒精喷灯火焰进行。 严重污染杂菌的废弃物品,用火焰焚毁而达到灭菌目的。
b。 热空气灭菌即干烤灭菌,利用加热的高温空气进行灭菌的方法。
常用电热干燥箱亦称电烘箱加热,它是通过电热丝进行加温并可调温。将需要灭菌的物品洗涤干净,擦去水珠,用纸包好,放到电烘箱内加热干燥。
干热灭菌的温度,一般在160~180°C之间,常用温度为165°C,恒温保持30分钟至2小时即可达到灭菌的目的。然后切断电源,待温度降到45°C以下,即可取出使用。
对于高温处理容易损坏的培养基及含水的物品,不宜用干热灭菌方法。② 湿热灭菌法利用蒸汽或沸水灭菌,是常用的一种灭菌法。
它不需像干热灭菌那样的高温,在同一温度下,湿热杀菌力比干热的杀菌力强。因为在湿热条件下,热蒸汽的穿透力强于干热,微生物吸收水分,使蛋白质易凝固变性,酶系统容易被破坏。
此外,当蒸汽与被灭菌的物质接触凝结成水时,能放出潜在热量,加速提高温度,从而能增强灭菌效力,灭菌的时间也可以缩短。 因各种微生物对温度的反应不同,故杀灭所需要的时间和温度的高低也不同。
湿热灭菌又分加压与不加压两种方法。a。
高压蒸汽灭菌:是在密封的髙压灭菌器内注水,加热后水沸腾产生蒸汽,灭菌器内压力不断增高,温度也随之升高,利用高温杀死微生物。使用高压灭菌器时应注意以下事项。
(a) 按照灭菌器要求的注水量,加水到指定的标度,最好加入开水,一方面可缩短升温时间,同时避免长期使用冷水锅内结水碱。(b) 将需要灭菌的培养基或器物放在灭菌器内。
装人的试管、菌种瓶、塑料袋等物不宜过挤,以利热蒸汽流通,特别是袋装培养基不能叠放紧压,妨碍蒸汽渗透,造成灭菌不彻底。 需灭菌的器物装好后,将灭菌器的盖密封,不能漏气,然后打开放气阀门。
(c) 接通电源或打开锅炉的进汽阀门加热。(d) 排除干净锅内的冷空气,是高压灭菌最重要又容易被人忽略的步骤。
空气的导热性能要比水蒸气差,潜热很小,但其热膨胀系数较大,灭菌锅内存有较多的冷空气,因此,灭菌时排出锅中的冷空气是非常必要的。 排放冷空气的方法有两种:一种是当水加热沸腾后空气由已打开的放气阀门排出,等蒸汽从气门有力地冲出后,说明空气已排完,可关闭气门继续加热,另一种方法是加热后不开气门,当气压表的指针上升到0。
5千克/厘米2时,打开放气阀门,排出冷空气,指针降至零后,再关上放气阀继续加热。 (e) 当压力上升到所需要的指标后,开始计算灭菌时间,灭菌过程中保持压力稳定,不能忽高、忽低。
特别应该注意安全阀门,如果安全阀失灵,当压力超过灭菌器最大的承受能力,会出现意外事故。(f) 达到灭菌要求时间后,关掉热源停止加热,排出蒸汽使压力慢慢下降。
排气的速度应适当。若排得太快,增大瓶内外的压力差,灭菌器中试管或三角瓶中的培养基会突然沸腾,冲脱瓶塞或沾污棉花塞;排得太慢,等于延长了灭菌时间,对一些培养基是不利的。
琼脂试管培养基和液体培养基,灭菌后去掉热源,让其自然排气,当压力表指针降至零时方可打开锅,一般来说,从开始排气到打开灭菌锅的时间为8~12分钟。 塑料袋培养料灭菌时,应让其自然冷却,当压力下降到0。
5千克/厘米2时,再打开排气阀门放气,以免在减压过程中袋内外产生压力差,击穿塑料袋导致污染杂菌。(g) 防止弄湿棉塞:灭菌前应将试管的棉花塞用油纸或塑料薄膜包好,灭菌时三角瓶的棉塞不能接触灭菌锅壁,瓶子上面应盖铝帽或防水油纸,以免锅盖内面的水流到棉塞上。
若棉塞潮湿,可在锅中烘烤一定时间再出锅。b。
常压间歇灭菌蒸汽不断从未密闭的金属器中散出,其内部压力与大气压相等,只能杀灭一些微生物的营养体,而不能杀死细菌的芽孢,所以必须配合间歇多次灭菌进行。此法适于没有高压灭菌设备或培养基中某些成分在l00°C以上髙温下易受破坏的情况。
将培养基或灭菌的物品放在灭菌器中,加热到l00°C后,持续30分钟,此时足以杀死细菌的营养体但不能杀死细菌的芽孢;冷却后取出,置室温下或25~30°C温箱中培养24小时,使芽孢萌发长成营养体,再放人蒸锅中灭菌3分钟,以杀死新萌发的营养体,如此连续三次,就可以将芽孢杀死。 但并非所有的芽孢都能得到萌发所需要的温度和营养条件,有时还可能残留少数未萌发的芽孢,而使灭菌不完全,这是间歇灭菌的基本缺点。
生活中常用的蒸笼,实际上就是一种蒸汽灭菌器。a常压蒸汽灭菌法采用自然压力。
物理方法有:干热灭菌法(包括火焰灼烧、烘箱热空气灭菌)、湿热灭菌法分常压(包括巴氏消毒法、煮沸消毒法、间歇灭菌法)和加压(包括常规加压灭菌法也叫做高压蒸汽灭菌发、连续加压灭菌法),还有低温抑菌(冷冻法)
化学方法:杀菌剂、消毒剂(常用,如3%~5%来苏儿、75%乙醇)、治疗剂(抗代谢药物磺胺类、抗生素、生物药物素)
除上述还有生物方法,其实生物药物素也属生物类灭菌法,比如酶抑制剂、免疫调节剂、受体拮抗剂、抗氧化剂等
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