研究水中微生物的方法(水中常见的微生物)
1.水中常见的微生物有哪些
水中常见的微生物有细菌、真菌、噬菌体、病毒、原生动物、藻类等。
1、细菌
细菌（学名：Bacteria）是生物的主要类群之一，属于细菌域。也是所有生物中数量最多的一类，据估计，其总数约有5*10^30个。细菌的形状相当多样，主要有球状、杆状，以及螺旋状。
2、真菌
真菌，是一种真核生物。最常见的真菌是各类蕈类，另外真菌也包括霉菌和酵母。现在已经发现了七万多种真菌，估计只是所有存在的一小半。大多真菌原先被分入动物或植物，现在成为自己的界，分为四门。
3、噬菌体
噬菌体（phage）是侵袭细菌的病毒，也是赋予宿主菌生物学性状的遗传物质。噬菌体必须在活菌内寄生，有严格的宿主特异性，其取决于噬菌体吸附器官和受体菌表面受体的分子结构和互补性。噬菌体是病毒中最为普遍和分布最广的群体。通常在一些充满细菌群落的地方，如：泥土、动物的肠道里，都可以找到噬菌体。
4、原生动物
原生动物是单细胞，细胞内有特化的各种胞器，具有维持生命和延续后代所必需的一切功能，如行动、营养、呼吸、排泄和生殖等。每个原生动物都是一个完整的有机体。
5、藻类
藻类是原生生物界一类真核生物（有些也为原核生物，如蓝藻门的藻类）。主要水生，无维管束，能进行光合作用。体型大小各异，小至长1微米的单细胞的鞭毛藻，大至长达60公尺的大型褐藻。一些权威专家继续将藻类归入植物或植物样生物，但藻类没有真正的根、茎、叶，也没有维管束。这点与苔藓植物（bryophyte）相同。
2.测定水中微生物（包括细菌真菌等）数量的方法
器材及培养
材料和试剂
蒸馏水， 自来水， 取自儿童公园的湖水， 牛肉膏蛋白胨琼脂培养基.
仪器或其他用具
灭菌三角烧瓶， 灭菌带玻璃塞瓶， 灭菌培养皿， 灭菌吸管， 灭菌量筒.
研究方法
采用平板菌落记数技术测定水中细菌总数.
水样的采取
自来水
先将自来水水龙头用火焰灼烧3 min 灭菌， 再开放水龙头5 min 后， 以灭菌三角烧瓶接取水样， 以待分析.
公园的湖水
应取距水面10~ 15 cm 的深层水样， 先将灭菌的带玻璃塞瓶， 瓶口向下浸入水中， 然后翻过来， 除去玻璃
塞， 水即流入瓶中， 盛满后， 将瓶塞盖好， 再从水中取出， 最好立即检查， 否则需放入冰箱中保存.
细菌总数的测定
自来水
Step 1 用灭菌吸管吸取1 mL 水样， 注入灭菌培养皿中. 共做两个平皿.
Step 2 分别倾注约15 mL 已溶化并冷却到45 e 左右的肉膏蛋白胨琼脂培养基. 并立即在桌上做平面
旋摇， 使水样与培养基充分混匀.
Step 3 另取一个空的灭菌培养皿， 倾注肉膏蛋白胨琼脂培养基15 mL， 作对照.
Step 4 培养基凝固后， 倒置与37 e 温箱中， 培养24 h， 进行菌落记数.
公园的湖水
Step 1 稀释水样， 取三个灭菌空试管， 分别加入9 mL 灭菌水. 取1 mL 水样注入第一管9 mL 灭菌水
内， 摇匀， 再自第一管取1 mL 到下一管灭菌水内， 如此稀释到第三管， 稀释度分别为10- 1 , 10- 2 , 10- 3 .
Step 2 自最后三个稀释度的试管中各取1 mL 稀释水加入空的灭菌培养皿， 每一稀释度共做两个培养皿.
Step 3 各倾注15 mL 已溶化并冷却到45 e 左右的肉膏蛋白胨琼脂培养基并立即在桌上摇匀.
Step 4 凝固后倒置于37 e 恒温恒湿培养箱中培养24 h.
菌落记数方法
1） 计算相同稀释度的平均菌落数. 若有大片菌苔生长时， 弃用； 以无片菌苔生长的培养皿记数. 若片状菌
苔大小不到培养皿的一半， 其余一半分布均匀， 将此一半计数@ 2.
2） 选择平均菌落数在30~ 300 之间的平板. 只有一个符合此范围时， 以该平均菌落数@ 稀释倍数. 有两
个在30~ 300 之间时， 按两者菌落总数比值决定， 比值小于2， 取平均； 比值大于2， 取较小的菌落数.
3） 若所有稀释度的平均菌落数均大于300， 则应按稀释度最高的平均菌落数@ 稀释倍数.
4） 若所有稀释度的平均菌落数均小于30， 则按稀释度的平均数@ 倍数.
5） 若所有稀释度的平均菌落数均不在30~ 300 之间， 则以最近30 或300 的平均菌落数@ 稀释倍数.
微生物的含量能否反应水的营养化程度？
能
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3.水中的微生物有哪些
自然界的水可分为地下水和地面水，除了地下深层水外，如湖泊，河流，海洋等各种地面水中都存在着各种各样的微生物。但它们所含的微生物种类，数量和分布都不相同。
其中有些是“土生土长”的，例如自养菌中的硫磺细菌，硝化细菌，铁细菌，光合细菌等。异养菌中的假单胞杆菌，放线菌，真菌，原生动物及藻类。在水生细菌中革兰氏阴性杆菌最多（占95%），阳性菌占4%，而球菌只占1%。
另一些水生细菌是外来的，它们来自土壤，空气，垃圾，工厂废物或城市下水道污水。来自前两者的微生物一般都是腐生性的，而来自下水道的微生物中，
4.如何观察水中的微生物,实验步骤和注意事项
热源，待自然冷却，压力恢复至零，温度降到 60 ℃以下 再开盖取物，以防突然减压液 体剧烈沸腾或容器爆破。
（3） 卧式压力锅蒸气灭菌器的使用按下列步骤进行： ① 关紧锅门，打开进气阀，将蒸气引入夹层进行预热，夹层内冷空气经阻气器自动 排出。 ② 夹层达到预定温度后，打开锅室进气阀，将蒸气引入锅室，锅室内冷空气经锅室 阻气器自动排出。
③ 待锅室达到规定的压力与温度时，调节进气阀，使保持恒定至 ④ 自然或人工降温至 60 ℃再开门取物，不得使用快速排出蒸气法，以防突然降压， 液体剧烈沸腾或容器爆破。 ⑤ 使用自动程序控制式压力蒸气灭菌器，在放好物品关紧门后，应根据物品类别按 动相应开关， 以便按要求程序自动进行灭菌， 灭菌时必须利用附设仪表记录温度与时间以 备查，操作要求应严格按照厂家说明书进行。
5 .灭菌温度与时间 （1） 干热灭菌器灭菌温度 160 ℃， 1.5-2h 。 (2) 压力蒸气灭菌 锅灭菌温度与时间 （二）间歇灭菌方法 1. 灭菌方法系利用不加压力的蒸气灭菌，某些物质经高压蒸气灭菌容易破坏，可用此 法灭菌。
（ 1 ）将欲灭菌物品置于锅内，盖上顶盖，打开排水口，使器内余水排尽。 （ 2 ）关闭排水口，打开进气门，根据需要消毒 10 ~ 20min 。
( 3 )灭菌完毕关闭进气门，取出物品待冷至室温温度，放入 37 ℃温箱过夜，次日仍 按上述方法消毒，如此三次，即可达到灭菌目的。 2 .血清凝固器使用方法，培养基中含有血清或鸡蛋特殊成份时，因高热会破坏其营 养成份，故用低温，可使血清凝固，又可达到灭菌目的。
（1） 在使用该法灭菌的血清等分装时，需严格遵守无菌操作，试管、平皿也经灭菌后 使用。 （2） 将培养基按要求使成斜面或高层， 加足水后， 接上电源， 升温 75 ~ 90 ℃ 1h 灭菌， 放 37 ℃温箱过夜，再如此灭菌三次。
3 .煮沸消毒：可用煮锅或煮沸消毒器，水沸腾后再煮 5 ~ 15 min ，也可在水中加入 2 ﹪石炭酸煮沸 5 min ，加入 0.02 ﹪甲醛 ， 80 ℃煮 60 min 均可达到灭菌目的 ， 但选用 煮沸消毒的增消剂时 ， 应注意对物品的腐蚀性 . 4 .灭菌处理 ： 灭菌后物品 ， 按正常情况已属无菌 ， 从灭菌器中取出应仔细检查放置 ， 以免 再度污染。 （1） 物品取出 ， 随即检查包装的完整性 ， 若有破坏或棉塞脱掉 ， 不可作为无菌物品使用。
（2） 取出的物品 ， 如为包装有明显的水浸者 ， 不可作为无菌物品使用。 （3） 培养基或试剂等 ， 应检查是否符合达到灭菌后的色泽或状态 ， 未达到者应废弃。
（4） 启闭式容器 ， 在取出时应将筛孔关闭。 （5） 取出的物品掉落在地或误放不洁这处 ， 或沾有水液 ， 均视为受到污染 ， 不可作为无 菌物品使用。
（6） 取出的合格灭菌物品 ， 应存放于贮藏室或防尘柜内 ， 严禁与未灭菌物品混放。 （7） 凡属合格物品 ， 应标有灭菌日期及有效期限。
（8） 每批灭菌处理完成后 ， 记录灭菌品名、数量、温度、时间、操作者。 四、有毒有菌污物处理要求 微生物实验所用实验器材、培养物等未经消毒处理，一律不得带出实验室。
1. 经培养的污染材料及废弃物应放在严密的容器或铁丝筐内，并集中存放在指定地 点，待统一进行高压灭菌。 2. 经微生物污染的培养物，必须经 121 ℃ 30min 高压灭菌。
3. 染菌后的吸管，使用后放入 5 ﹪煤酚皂溶液或石炭酸液中，最少浸泡 24h （消毒 液体不得低于浸泡的高度）再经 121 ℃ 30 min 高压灭菌。 4. 涂片染色冲洗片的液体，一般可直接冲入下水道，烈性菌的冲洗液必须冲在烧杯 中，经高压灭菌后方可倒入下水道，染色的玻片放入 5 ﹪煤酚皂溶液中浸泡 24 h 后，煮 沸洗涤。
做凝集试验用的玻片或平皿，必须高压灭菌后洗涤。 5. 打碎的培养物， 立即用 5 ﹪煤酚皂溶液或石炭酸液喷洒和浸泡被污染部位， 浸泡半 小时后再擦拭干净。
污染的工作服或进行烈性试验所穿的工作服、帽、口罩等，应放入专用消毒袋内，经 高压灭菌后方能洗涤。 五、培养基制备要求 培养基制备的质量将直接影响微生物生长。
因为各种微生物对其营养要求不完全相同， 培养目的的不同，各种培养基制备要求如下： 1 .根据培养基配方的成分按量称取，然后溶于蒸馏水中，在使用前对应用的试剂药 品应进行质量检验。 2 . PH 测定及调节： PH 测定要在培养基冷至室温时进行，因在热或冷的情况下， 其 PH 有一定差异，当测定好时，按计算量加入碱或酸混匀后，应再测试一次。
培养基 PH 值一定要准确， 否则会影响微生物的生长或影响结果的观察。 但需注意因高压灭菌可 影响一些培养基的 PH 降低或升高，故不宜灭菌压力过高或次数太多，以免影响培养基 的质量，指示剂、去氧胆酸钠、琼脂等一般在调完 PH 后再加入。
3 .培养基需保持澄清，便于观察细菌的生长情况，培养基加热煮沸后，可用脱脂棉 花或绒布过滤，以除去沉淀物，必要时可用鸡蛋白澄清处理，所用琼脂条要预先洗净晾干 后使用，避免因琼脂含杂质而影响透明度。 4 .盛装培养基不宜用铁、铜等容器，使用洗净的中性硬质玻璃容器为好。
5 .培养基的灭菌既要达到完全灭菌目的，又要注意不因加热而降低其营养。
5.水中有那些微生物
水中常见的微生物有细菌、真菌、噬菌体、病毒、原生动物、藻类等。
1、细菌
细菌（学名：Bacteria）是生物的主要类群之一，属于细菌域。也是所有生物中数量最多的一类，据估计，其总数约有5*10^30个。细菌的形状相当多样，主要有球状、杆状，以及螺旋状。
2、真菌
真菌，是一种真核生物。最常见的真菌是各类蕈类，另外真菌也包括霉菌和酵母。现在已经发现了七万多种真菌，估计只是所有存在的一小半。大多真菌原先被分入动物或植物，现在成为自己的界，分为四门。
3、噬菌体
噬菌体（phage）是侵袭细菌的病毒，也是赋予宿主菌生物学性状的遗传物质。噬菌体必须在活菌内寄生，有严格的宿主特异性，其取决于噬菌体吸附器官和受体菌表面受体的分子结构和互补性。噬菌体是病毒中最为普遍和分布最广的群体。通常在一些充满细菌群落的地方，如：泥土、动物的肠道里，都可以找到噬菌体。
4、原生动物
原生动物是单细胞，细胞内有特化的各种胞器，具有维持生命和延续后代所必需的一切功能，如行动、营养、呼吸、排泄和生殖等。每个原生动物都是一个完整的有机体。
