核酸的提取和制备通常还用哪些方法(PCR反应模板核酸的提取制备方法是什么)
1.PCR反应模板核酸的提取制备方法是什么
异硫氰酸胍提取编辑异硫氰酸胍法提取制备模板核酸此法主要用于RNA的提取.标本为组织细胞及血清等.1.异硫氰酸胍消化液异硫氰酸胍4mol/L柠檬酸钠（PH7.0）25mmol/L十二烷基肌酸钠0.5%β巯基乙醇0.1mol/L2.消化方法：用50~100ul细胞悬液及血清，加等体积的异硫氰酸胍消化液振混匀后，或65℃1小时，或室温放置数分钟，然后加1/10体积的3mmol/LpH5.2的醋酸钠缓冲液，再加等体积的酚：氯仿，用力振摇约10s,10000r/min，离心5min，取上清加等体积异丙醇20℃放置3h后，14000r/min离心15min，沉定用75%冰冷乙醇离心洗涤1~2次，真空干燥，沉淀用TE缓冲液溶解即可用于逆转录PCR扩增，或放20℃保存。
2.核酸纯化试剂的使用方法和注意事项有哪些
使用方法因厂家不同而不同，下面是一氪生物技术的核酸纯化试剂使用方法及注意事项，供参考：
步骤一：使用无水乙醇与纯化水配制70%乙醇备用。
步骤二：从2-8℃冰箱中取出磁珠悬浮液，在室温条件下震荡混匀，平衡30min。
步骤三：将充分震荡混匀平衡后的磁珠加入待纯化酶反应或PCR反应产物溶液中。磁珠加入体积分别参考图1和图2，若待纯化产物体积不足，可用纯化水或10mM Tris-HCl(pH8.0)补充至相应体积。
步骤四：用移液器反复吹打10次，将磁珠悬浮液和PCR产物或者酶反应物充分混匀，室温条件下静置5min。
步骤五：将反应板放置在磁力架上，静置2min，待溶液澄清后将上清吸走，转入废液桶内。
步骤六：向反应板中加入200μL新鲜配置的70%的乙醇，室温静置30s。静置结束后将乙醇吸走，转入废液桶内。操作环节不可将反应板从磁力分离架上拿下或将磁珠吹散。
步骤七：重复步骤六。
步骤八：保持反应板置于磁力架上状态，室温开盖晾干2min以去除残存的乙醇。
步骤九：将反应板从磁力架上取下来，加入50μL洗脱液，移液器反复吹打10次混匀，室温静置3min。洗脱液加入量根据实际需要而定，但应不少于5μL。
步骤十：将反应板重新放置在磁力架上，室温静置1min，上清液即纯化后的DNA产物。
步骤十一：将上清液转入新的反应管或者反应板中，供下一步反应或检测使用。
3.要获取完整核酸需要采取什么措施
在dna的提取过程中防止脱氧核糖核酸酶的水解作用，应采取哪些措施
相同点：都能以DNA为模板，从5'向3'进行核苷酸或脱氧核苷酸的聚合反应。
不同点
1、作用底物不同。RNA聚合酶底物是NTP;DNA聚合酶底物是dNTP。
2、RNA聚合酶作用不需要引物，而DNA聚合酶作用需要引物。
3、RNA聚合酶本身具有一定的解旋功能，而DNA聚合酶没有，当需要解开双链的时候要解旋酶和拓扑异构酶的帮助。
4、RNA聚合酶只具有5'到3'端的聚合酶活性，而DNA聚合酶不仅有5'到3'端的聚合酶活性，还具有3'到5'端的外切酶活性。保证DNA复制时候校对，所以复制的忠实性高于转录的。
5、RNA聚合酶通常作用于转录过程；DNA聚合酶通常作用于DNA复制过程
4.提取制备RNA常用的方法有哪几种,各有何优缺点
常见的RNA提取方法有苯酚法、阴离子去污剂法、LiCl一尿素法、改良的Gomez法、异硫氢酸胍法、CTAB法、热硼酸法及改良热硼酸法、TRIZOL试剂快速提取法。
RNA提取时，就变性剂的选择来说，CTAB(CTAB法)比异硫氰酸胍（RIZOL试剂法）和 SDS（改良热硼酸法）更有效；就CTAB法来说，由于以CTAB为变性剂，同时加入PVP和β一巯基乙醇共同作用变性蛋白、抑制RNase的活性，使用无水乙醇或异丙醇沉淀杂蛋白和总核酸等，然后再选择性地分离出RNA。
5.DNA的提取方法有多少种
DNA的提取方法有7种：酚抽提法、甲酰胺解聚法、玻璃棒缠绕法、异丙醇bai沉淀法、表面活性剂快速制备法、加热法快速制du备、碱变性快速制备。
DNA的提取原则
1、保证核酸一级结构的完整性；
2、核酸样品中不应存在对酶有抑制作用的有机溶剂和过高浓度的金属离子；
3、其他生物大分子如蛋白质、多糖和脂类分子的污染应zhi降低到最低程度；
4、其他核酸分子，如RNA，也应尽量去除。
扩展资料
提取daoDNA的注意事项
1、各操作内步骤要轻柔，尽量减少DNA的人为降解。
2、注意防止非核酸类成分干扰。
3、要减少DNA的降解，促进DNA与蛋白等的分相及DNA沉淀。
4、提取DNA过程中所用到的试剂和器材容要通过高压烤干等办法进行无核酸酶化处理。
5、所有试剂均用高压灭菌双蒸水配制。
参考资料来源：百度百科-dna提取
6.在核酸的分离提取和纯化过程中,都利用核酸的哪些生物学特性
核酸（nucleic acid）是遗传信息的携带者，是基因表达的物质基础。无论是进行核酸结构还是功能研究，首先需要对核酸进行分离和纯化。核酸样品质量将直接关系到实验的成败。核酸分离、纯化原则：1.保持核酸分子一级结构的完整性。因为遗传信息全部储存在一级结构之中，核酸的—级结构还决定其高级结构的形式以及和其他生物大分子结合的方式。2.分离核酸原则：1）温度不要过高；2）控制pH值范围（pH值5-9）; 3）保持一定离子强度； 4）减少物理因素对核酸的机械剪切力.
在核酸分离提取中最重要的是要防止核酸的生物降解，细胞内或外来的各种核酸酶能消化核酸链中的磷酸二酯键，破坏核酸一级结构。所用器械和一些试剂需高温灭菌，提取缓冲液中需加核酸酶抑制剂。
常用的DNA酶抑制剂有1.金属离子螯合剂：如EDTA-Na2（乙二胺四乙酸二钠）、8-羟基喹啉。2.阴离于型表面活性剂如SDS，该试剂除对核酸酶有抑制作用外，还能使蛋白质变性，并与变性蛋白结合成带负电荷的复合物，该复合物在高盐溶液中沉淀。
常用的RNA酶（RNAase）抑制剂有：1.皂土（bentonite ）作用机制：皂土带负电荷，能吸附RNase，使其失活。2. DEPC（二乙基焦碳酸盐） （C2H5OCOOCOOC2H5）粘性液体，很强的核酸酶抑制剂。作用机制：与蛋白质中His结合使蛋白变性。
以上答案希望对你有帮助。
7.DNA的提取方法有多少种
DNA的提取方法有7种：酚抽提法、沉淀法、表面活性剂快速制备法、加热法快速制备、碱变性快速制备。
DNA的提取原则 1、保证核酸一级结构的完整性； 2、核酸样品中不应存在对酶有抑制作用的有机溶剂和过高浓度的金属离子； 3、其他生物大分子如蛋白质、多糖和脂类分子的污染应降低到最低程度； 4、其他核酸分子，如RNA，也应尽量去除。 扩展资料提取DNA的注意事项 1、各操作步骤要轻柔，尽量减少DNA的人为降解。
2、注意防止非核酸类成分干扰。 3、要减少DNA的降解，促进DNA与蛋白等的分相及DNA沉淀。
4、提取DNA过程中所用到的试剂和器材要通过高压烤干等办法进行无核酸酶化处理。 5、所有试剂均用高压灭菌双蒸水配制。
参考资料来源：百度百科-dna提取。
8.提取DNA的方法有哪些
DNA提取的几种方法
(1).浓盐法
利用RNP和DNP在电解溶液中溶解度不同，将二者分离，常用的方法是用1M 氯 纳提取化钠抽提，得到的DNP粘液与含有少量辛醇的 氯仿一起摇荡，使乳化，再离心除去蛋白质，此时蛋白质凝胶停留在水相及氯仿相中间，而DNA位于上层水相中，用2倍体积95%乙醇可将DNA 钠盐沉淀出来.
也可用0.15 MNaCL液反复洗涤细胞破碎液除去RNP，再以1MNaCL提取脱氧核糖蛋白，再按氯仿---异醇法除去蛋白.
两种方法比较，后种方法使核酸降解可能少一些.
以稀盐酸溶液提取DNA 时，加入适量去污剂，如SDS可有助于蛋白质与DNA 的分离.在提取过程中为抑制组织中的DNase对DNA 的降解作用，在氯化钠溶液中加入柠檬酸钠作为金属离子的烙合剂.通常用.15MNaCL,0.015M柠檬钠，并称SSC溶液，提取DNA.
(2).阴离子去污剂法：
用SDS或二甲苯酸钠等去污剂使蛋白质变性，可以直接从生物材料中提取DNA .由于细胞中DNA与蛋白质之间常借静电引力或配位键结合，因为阴离子去污剂能够破坏这种价键，所以常用阴离子去污剂提取DNA.
(3).苯酚抽提法：
苯酚作为蛋白变性剂，同时抑制了DNase的降解作用.用苯酚处理匀浆液时，由于蛋白与DNA 联结键已断，蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶.蛋白分子溶于酚相，而DNA溶于水相.离心分层后取出水层，多次重复操作，再合并含DNA 的水相，利用核酸不溶于醇的性质，用乙醇沉淀DNA .此时DNA是十分粘稠的物质，可用玻璃漫漫绕成一团，取出.此法的特点是使提取的DNA保持天然状态 .
( 4).水抽提法：
利用核酸溶解于水的性质，将组织细胞破碎后，用低盐溶液除去RNA，然后将沉淀溶于水中，使DNA充分溶解于水中，离心后收集上清液.在上清中加入固体氯化钠调节至2.6M.加入2倍体积95%乙醇，立即用搅拌法搅出.然后分别用66% 80%和95%乙醇以及丙铜洗涤，最后在空气中干燥，既得DNA样品.此法提取的DNA中蛋白质含量较高，故一般不用.为除蛋白可将此法加以改良，在提取过程中加入SDS.
