将已经液化的精液标本均匀混合,用白细胞计数吸管吸精液至0.5刻度,再吸稀释液至11刻度,振荡三分钟,然后置于血球计数板内,计数二大格(每格面积1平方毫米)之精子数,在尾数后加5个“0”即得每毫升精液内精子数。
例如计数为1280个,则每毫升精子应为128,000,000。精液稀释液之配制:重碳酸钠5克、福尔马林1毫升、蒸馏水加至100毫升。
稀释液内重碳酸钠有消化粘液的作用,福尔马林有使精子制动的作用。如精液之稠度过高而不易吸取时,可以精液1毫升混匀于稀释液19毫升内,稀释后进行计数。
如精子的数目极少,亦可改为稀释10倍计数。每次排精75%的精子是从附睾尾部所贮存的,还有25%是由输精管道的其他部分来的,因此单凭一次排精的精子计数来衡量睾丸生精机能是不全面的。
只有在排精后间隔4-5天以后多次精液检查,才能比较正确地从这些精子计数来反映睾丸的生精机能。
为了比较精确地评定精子密度,可采用精子计数的方法,即应用计数血细胞的方法计算精子数,将1滴精液置于玻片上,用红细胞吸管吸精液至“0.5”刻度处,然后吸人3%气花钠液至“1.0”刻度处,3%气化钠用于杀死精子和进行稀释,便于观察计数。
用拇指和食指分别按住吸管的两端,轻轻摇荡,使精液和气化钠充分混匀,然后弃去吸管前端数滴,将吸管尖端放在计箅板与盖玻片之间的空隙边缘,使吸管内精液流入计算室,注意防止精液流到盖玻片上面。计算室用刻线划分成25个正方形大方格,每个大方格又划分为16个小方格,共400个小方格,面积为1毫米2。
将计算板放在显微镜下计数5个大方格(80个小方格)的精子数,所选择的5个大方格,应位于一条对角线上,或四角各取1个角再加中央1个。
有以下两种方式: (1)精子的取样与计数将备用的精液搅匀,吸出几十毫升 置于杯中,加人1〜2滴碘酒,将精子固定后摇匀,取1滴置于 100倍的显微镜下计数(应在镜下计数2〜3滴,取平均数),换 算出每毫升精液的精子浓度(每滴精子数X每毫升水的滴数=每 毫升含有精子数)。
也可以将上述水样置于血球计数板中用显微 镜计数。 (2)卵的取样与计数卵粒较精子大得多,计数比较容易。
将卵液搅匀,用移液管吸取2〜10毫升(视卵的密度)放人玻璃 杯中,加少量清水,把杯子放在深色的基面上,用肉眼即可清晰 地将卵全部计数。或将含卵的水体充分轻轻搅匀,将2毫升移液 管(管口要粗些)伸入水中,取出水样直接用肉眼计算管中的卵 量。
上述两种方法取样计数至少3次以上,求平均值,换算出水 中每毫升的含卵量与全水体总卵量。
检测精子的质量最好是去医院,医院会有专门的仪器帮助检验精子的质量的。注意去医院检测之间最好不要有太大的心里情感起伏,最好是心情比较平静的时候,这样更加有利于检测精子的质量。
检测精子质量的标准有哪些
1、精液量。一个正常的成年男性每次射精的量为≥2ml,大于7ml时为过多不仅精子的密度降低,而且易从阴道中流出以致精子总数降低;小于2ml则为精液量过少,精液与女性生殖道接触面积小,或因粘稠不利于精子进入女方宫颈口。精液量过多、过少属于精液精子异常之一,精液异常严重的影响了精子的数量和质量,都可能最终导致男性不育。
2、存活率。射精之后1小时内检查,活精子≥50%为正常情况。副性腺炎症、精索静脉曲张、精液中存在抗精子抗体等原因都会影响男性精子存活率。
3、颜色。正常精液是灰白色或略带黄色,乳白色或黄绿色有可能是生殖道或副性腺存在炎症。粉色、红色可能是血性精液,常见于副性腺、后尿道的炎症。偶可见于结核或肿瘤。
4、粘稠度。检查时候将玻璃棒接触已经液化的精液,轻轻提起的时候可形成小于2cm的精液丝为正常情况。
5、精子计数。一般情况下每毫升精液中的精子数≥20*106ml,如果过高或过低都会影响精子活动力和正常功能。
6、酸碱度。正常精子的PH值在7.2—7.8之间,这样就有利于综合女性阴道的酸性环境,这样精子活动力就强,容易使女方受怀孕如果是偏酸性的,就提示有炎症,那样受孕的机会就少。
7、染色体分析。对于检测精子质量可以通过男性的染色体进行分析,如果染色体方面存在了问题,就会引起精子数目过少、精子大量畸形、活动能力过低或根本就没有精子的结果。
影响精子成活率低的因素主要有: 1、生殖系统感染(前列腺炎,精囊炎,附睾炎,尿道炎)使精液成分改变,镁、锌、柠檬酸、果糖减少和pH升高都会影响精子活力造成影响。
2、长期禁欲导致精子活力度差,死精子多,这种情况属正常,所以检查精液前以禁欲5~7d为宜。 3、精索静脉曲张造成阴囊温度升高,也可以使精子活动力低下。
4、睾丸损伤或病变导致精子营养分泌不足,引起的精子成活率低。 精子成活率检查 精液常规查哪些方面 以往,不少人认为只要一检查精液常规就可以了解男性的生育能力是否正常,其实这是非常片面的。
目前常规精液分析主要可以了解精液量、精子密度及其精液中精子的总数量、精子凝集、精子活力与活率、精子形态、精液液化等方面的信息。 实际上这些内容的分析,只是非常表浅的分析,有时还难以真正了解精子的功能和受精潜能,特别是在人工授精及试管婴儿方面,尚不能仅仅通过精液常规所提供的信息,决定是否可以进行人工授精。
宫颈粘液穿透试验 精子活力是否正常,是自然受孕和提高人工授精成功率的关键。精子要穿透宫颈粘液,通过女性生殖道达到授精部位,穿透卵丘与透明带,必须具有一定的活力,缺乏活力的精子数量再多也是没有用处的。
宫颈粘液穿透试验,也是在不育症患者中经常需要做的一项检查。一般情况下,影响精子穿透宫颈粘液的常见因素为宫颈粘液的理化状态、精浆酶的活性、精子的运动质量等。
了解精子与宫颈粘液的相互作用,临床目前多采用性交后试验的方法。在人工授精的时候,一定要尽量选择穿透宫颈粘液能力强的精子,这样对提高受孕率具有积极作用。
精子功能的生化指标 了解精子功能的生化指标,对准确评价男性生育能力十分有益。在精浆中,存在着包括酶、小分子有机物、无机物在内的各种生化成分。
这些成分的存在对保护、促进与维护精子的正常功能具有非常重要的意义。 在这些成分中,乙酰肉毒碱显得非常重要,因为它是精子运动的一种能源储备形式,对精子活力的产生和加强具有重要的作用。
获能及其顶体反应的检测,对部分不育症来说是应查项目。在受精过程中,顶体蛋白酶及透明质酸酶的作用最为重要。
当精子与卵泡结合的初期,精子就会遇到围绕在卵母细胞周围的卵丘细胞的阻拦,精子必须穿过卵丘的基层,然后向透明带“进军”。 顶体反应 精子获能后,这些酶被释放出来,以分解卵细胞周围的放射冠和透明带,为精子进入卵子打开方便之门。
倘若缺乏这些酶的作用,精卵结合将成为可望不可及的分离结局,受孕也就成为一句空话。在人类生育过程中,顶体反应同样也是相当重要的。
该反应是一种使精子顶体区前2/3处以及精子浆膜和外顶体膜有顺序的空泡化过程,也是为精子进入卵泡促成精卵结合的最后过程。这一过程出现“故障”,男性就有可能难以实现正常生育。
因而,目前在临床上经常要检查精子的顶体反应是否正常。 其他方面 之外,检查精液中非精子细胞包括未成熟的精原细胞、精母细胞、生殖脱落的上皮细胞、多形核白细胞、巨噬细胞、淋巴细胞、单核细胞等,对精液中的非精子细胞的全面正确评价、精子计数及其活力,均有非常重要的作用。
例如,医学研究业已表明精液中的白细胞及其产物,可降低精子的活动率和活动力,前者还会刺激生殖道产生局部抗精子抗体,影响或阻碍精子的运动和成熟,影响精子穿透卵子的能力。只有得到了正确的精子检查结果,才能进行有效的治疗。
对于精子成活率低该怎么办呢? 首先通过精子分析仪检查出精子成活率是多少,再了解患者有没有男科其他病史或疾病,确定是否有其他疾病而引起精子成活率低。最后制订详细的治疗方案,例如患者有生殖感染疾病,必须先治疗生殖感染疾病,同时戒影响精子成活率的不良习惯,如吸烟、饮酒等。
再进行中西医联合施治,并配合使用物理疗法,达到理想的治疗效果。当然患者也必须按医嘱配合治疗,并加强自身锻炼提高身体素质,注意饮食搭配,按医嘱食用一些有助精子生长的食物等等,以便全方位提高精子成活率,达到理想的治疗效果。
以上介绍了有关精子成活率低的问题,只要患者积极采取治疗措施,一般都可以恢复正常的精子活率,但必须到正规专业的医院进行治疗,切记不要依赖一些偏方,要以科学的态度对待才是正确解决办法。
MAKLER 精子计数板使用说明书 一、描述: Makler 精子计数板(腔室)是一种方便精子计数的设备,用于快速精确的精子计数、活动性和形态学评价,可使用未稀释的样品。
计数板包括两个部分: 1. 下面的主要部分有一个金属基底(A)和两个把手(H)。在基底的中心有一个光学平玻璃制的平盘(D),样品放置其上。
在平盘周围有四个针(P)。他们的尖端比平盘高10微米。
2. 上面部分是覆盖玻璃(C)被一个金属环环绕。在他的下表面中心有一个 1 mm平方的格子,被分成100个方格,每个是0.1 mm * 0.1mm 。
当覆盖玻璃放置在四个针上时,在一行上的10个方格包围的空间就是一毫升的百万分之一。因此,在10个方格里的精子头数量代表着他们以 百万/mL 为单位的浓度。
二、腔室的准备: 在把样品放在平盘上之前,确保相对表面彻底清洁且无尘,因为大多数颗粒的尺寸大于玻璃间的狭小空间。为了此目的,用镜头纸擦两个表面。
清洁度可以通过把覆盖玻璃放置到四个针上,观察四个接触点彩色边纹(Newton现象)来检查。对着荧光灯可以看到最好的效果。
三、精液分析的方法: 充分混合样品,注意避免产生气泡。通过木棒或移液器的帮助,在平盘中心区域放置一小滴。
用手指拿起覆盖玻璃黑色点的相反面,并立即放在四根针上。轻柔按下,再次观察彩色边纹。
液滴会在平盘的整个区域扩散成厚度10微米的薄层。 只要针没有被淹没,多余的不会影响正常的分析。
一旦覆盖玻璃就位,避免触摸、抬起以及再次覆盖。因为这会改变腔室内精子的平均分布。
用把手拿起腔室并放置在显微镜平台上。可能需要用腔室夹头来进行固定。
四、特别注意事项 1,绝对不要对此腔室使用40* 物镜。这样盖玻片在聚焦时会被破坏。
2,即使使用合适的20* 物镜,也要小心不要压到覆盖玻璃上。 一般当物镜末端距离表面1mm的时候,图像是清晰的。
如果因为不正确的使用显微镜导致覆盖玻璃损坏,我们不会负责。 3,推荐使用20* 物镜和10* 目镜。
不推荐使用10* 物镜,因为精子看起来会太小,除非用20* 目镜。 五、精子计数: 如果精子太密集和活动,他们首先需要被固定。
这很容易做到,通过把样品一部分转移到另一个测试管。然后测试管插入50℃-60℃热水中,大约5分钟。
一滴充分混合的,预热的样品放置在腔室上并盖上覆盖玻璃。在格子的方格里精子头被计数,与血液学中计数血细胞的方法一样。
在此精子的数量是最重要的,在连续一列10个方格里对其计数。数量代表了以 百万每毫升为单位的浓度。
在其他一列或两列里重复此操作,以测定平均值。可以选择用其他2或3滴样品进行计数以提高计数的可靠性。
在精子缺乏症样品中,推荐在整个格子区域计数。 在精子聚焦之后,移动显微镜平台把各自定位在视野中心。
然后,调节腔室以使格子线处于水平和垂直位置。 在此搜索期间你可能会观察到: A)精子分别是否均匀?如果不是,样品没有混合好。
B) 是否所有精子都在一个聚焦平面,没有模糊?如果不是,可能表面没有清洁或两个表面之间有大的颗粒。 任意情况,都要从开始重复。
六、活动性评价: 推荐在样品准备好3-5分钟之内进行活动性评价,以避免从周边移动过来的精子的干扰。计数9或16格内所有不能动的精子。
然后计数相同区域内能动的精子且评估移动等级+1到+4. 在格子的另一个区域重复此过程,以及另外3到4滴样品并计算平均值。 这样的评估比原始载玻片上的要精确很多,因为那里精子被盖玻片压缩且活动性被损害。
Makler精子计数板提供了标准条件,对所有分析样品精子都可以在一个光滑的水平面自由移动。 七、形态学: 快速精子形态学评价可以从一个湿的未染色的样品进行,其包含固定的精子。
推荐使用一个相差显微镜。在格子的一个特定区域计数所有正常和不正常精子,且从其他样品重复此过程以达到总计数200。
显然,精子缺乏症样品扫描的精子数可以更低。腔室不适合染色的,干的样品进行形态学测定。
八、特殊情况: 气泡:格子区域如果出现气泡,推荐换一滴样品,除非气泡非常小,不影响分析。 大的灰尘颗粒,纤维等,也会通过改变空间大小来影响计数,也应该更换一滴样品。
如果样品没有混合完全,高度粘稠,或腔室有颗粒或灰尘;在同一样品不同滴之间计数会出现较大差别。 凝聚:在腔室里有时周围的精子会聚集,如果在计数之前过去了太久。
这种情况下,更换此滴样品为适当混合的新样品。在个别情况下,在格子区域内会出现胶状聚集,此时应更换样品。
结晶:样品时间过长可能包含晶体,可能不会影响计数,但使计数更困难。有时候,这些晶体太大,可能会损坏表面区域。
因此,分析包含晶体的样品时需特别注意。 九、为了重复使用的清洗和准备: 不要用自来水淋洗或浸泡腔室。
把刷子蘸水或非腐蚀性杀菌溶液,并擦玻璃的两个面。然后,挤压刷子擦掉剩下的水。
最后用无毛镜头纸擦干表面,尽量避免触摸针的尖端。腔室现在可以重复使用了。
一般来说,一旦检查固定,不需要改变聚焦。无需提高物镜,简单的把腔室滑进滑出即可。
十、附 件: 清洁刷 无毛镜头纸 腔室夹头——在精 子。
精子计数。
一般以每毫升精液中的精子数表示。正常精子密度>20 x 106/毫升,同时也要综合精子总数评价精子的数量才够全面,总数大于 45 x106/—次射精。
其异常常见于各种原因导致的睾丸生精功能下降、精 索静脉曲张、有害金属和放射性损害等。精子数量减少,可因精子进人子 宫腔及输卵管的机会减少而致生育力低下或不育。
如精子计数大于250 x 106/毫升为精子过多,因其活动力受影响也可能导致不育。精液中无精子 为无精子症,应离心确定在沉渣中无精子,倾去精浆后将沉渣重新悬浮, 经系统和彻底检查后发现无精子,才能作出无精子的诊断。
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