核酸含量的测定方法各有何优缺点(测定核酸含量的方法)
1.测定核酸含量的方法有哪些
核酸中的有机无机磷酸——→无机磷酸+钼酸——→磷钼酸+还原剂（抗坏血酸等）——→钼兰
钼兰的最大吸收波长在660nm，在一定浓度范围内，溶液的吸收值与无机磷的含量成正比。该法测得的是总磷量，需减去无机磷的含量才是核酸的含磷量。
（二）定糖法
核酸中的戊糖可在浓盐酸或浓硫酸作用下脱水生成醛类化合物，醛类化合物可与某些成色剂缩合成有色化合物，可用比色法或分光光度法测定其溶液中的吸收值，在一定浓度范围内，溶液的吸收值与核酸的含量成正比。
1、核糖的测定
生成的绿色化合物在λ=670nm处有最大的吸收值。
2、脱氧核糖的测定
DNA中的脱氧核糖可在浓硫酸作用下脱水生成ω-羟基-γ-酮戊酸，该化合物可与二苯胺生成兰色化合物，在λ=595nm处有最大吸收值。
（三）紫外吸收法
根据核酸分子中的嘌呤环和嘧啶环在λ=260nm处有最大吸收值，可采用紫外分光光度法测定核酸的含量。
2.紫外可见分光光度计法测核酸含量有何优缺点
方便，灵敏，除了知道含量，还知道组成成分。
从吸收光谱中，可以确定最大吸收波长λmax和最小吸收波长λmin。物质的吸收光谱具有与其结构相关的特征性。
可以通过特定波长范围内样品的光谱与对照光谱或对照品光谱的比较，或通过确定最大吸收波长，或通过测量两个特定波长处的吸收比值而鉴别物质。
在最大吸收波长处测量一定浓度样品溶液的吸光度，并与一定浓度的对照溶液的吸光度进行比较或采用吸收系数法求算出样品溶液的浓度。
扩展资料：
物质对光的选择性吸收波长，以及相应的吸收系数是该物质的物理常数。在一定条件下，物质的吸收系数是恒定的，且与入射光的强度、吸收池厚度及样品浓度无关。当已知某纯物质在一定条件下的吸收系数后，可用同样条件将该供试品配成溶液，测定其吸光度。
即可由上式计算出供试品中该物质的含量。在可见光区，除某些物质对光有吸收外，很多物质本身并没有吸收，但可在一定条件下加入显色试剂或经过处理使其显色后再测定，故又称之为比色分析。
参考资料来源：百度百科-紫外-可见分光光度法
3.核酸含量的测定方法及原理都有哪些
核酸定量常用方法及原理如下： 1、光吸收法：核酸中碱基共轭结构在近紫外光波长260nm处有最大吸收，吸收强度与核酸浓度成正比，因此可以用于核酸定量。
2、定P法：核酸中P含量约为9.5%，因此可以通过测定样品中的有机P量来进行核酸定量。核酸是由许多核苷酸聚合成的生物大分子化合物，为生命的最基本物质之一。
核酸广泛存在于所有动植物细胞、微生物体内，生物体内的核酸常与蛋白质结合形成核蛋白。不同的核酸，其化学组成、核苷酸排列顺序等不同。
根据化学组成不同，核酸可分为核糖核酸（简称RNA）和脱氧核糖核酸（简称DNA）。
4.核酸含量测定的方法和原理都有哪些
核酸定量常用方法及原理如下： 1、光吸收法：核酸中碱基共轭结构在近紫外光波长260nm处有最大吸收，吸收强度与核酸浓度成正比，因此可以用于核酸定量。
2、定P法：核酸中P含量约为9.5%，因此可以通过测定样品中的有机P量来进行核酸定量。核酸是由许多核苷酸聚合成的生物大分子化合物，为生命的最基本物质之一。
核酸广泛存在于所有动植物细胞、微生物体内，生物体内的核酸常与蛋白质结合形成核蛋白。不同的核酸，其化学组成、核苷酸排列顺序等不同。
根据化学组成不同，核酸可分为核糖核酸（简称RNA）和脱氧核糖核酸（简称DNA）。
5.用紫外分光光度法测定核酸的缺点有哪些
核酸、核苷酸及其衍生物的分子结构中的嘌呤、嘧啶碱基具有共轭双健系统（-C=C一C=C 一），能够强烈吸收250~280nm 波长的紫外光.核酸（DNA,RNA）的最大紫外吸收值在260nm 处.遵照Lambert-Beer 定律，可以从紫外光吸收值的变化来测定核酸物质的含量.
在不同pH 溶液中嘌呤、嘧啶碱基互变异构的情况不同，紫外吸收光也随之表现出明显的差异，它们的摩尔消光系数也随之不同.所以，在测定核酸物质时均应在固定的pH溶液中进行.
核酸的摩尔消光系数（或吸收系数），通常以ε（ρ）来表示，即每升含有一摩尔核酸磷的溶液在260nm 波长处的消光值（即光密度，或称为光吸收）.核酸的摩尔消光系数不是一个常数，而是依赖于材料的前处理、溶液的pH 和离子强度发生变化.它们的经典数值（pH = 7.0）如下：
DNA 的ε（ρ）= 6 000 8 000
RNA 的ε（ρ）= 7 000 10 000
小牛胸腺DNA 钠盐溶液（pH = 7.0）的ε（ρ）= 6 600,DNA 的含磷量为9.2%，含1μg/mL DNA 钠盐的溶液光密度为0.020.RNA 溶液（pH = 7.0）的ε（ρ）= 7 700~7 800,RNA 的含磷量为9.5%，含1μg /mL RNA 溶液的光密度为0.022~0.024.采用紫外分光光度法测定核酸含量时，通常规定：在260nm 波长下，浓度为1μg/mL 的 DNA 溶液其光密度为0.020，而浓度为1μg/mL 的RNA 溶液其光密度为0.024.因此，测定未知浓度的DNA (RNA)溶液的光密度OD260nm，即可计算测出其中核酸的含量.该法简单、快速、灵敏度高，如核酸3μg/mL 的含量即可测出.对于含有微量蛋白质和核苷酸等吸收紫外光物质的核酸样品，测定误差较小，若样品内混杂有大量的上述吸收紫外光物质，测定误差较大，应设法事先除去.
由于降解或水解作用，核酸的光密度可以增高约40%，这就是众所周知的增色效应（hyperchromic effect）.在大分子的核酸中，氢键和π-键相互作用改变了碱基的共振行为.因此，核酸的光密度低于构成它的核苷酸的光密度，该现象称为减色效应（hypochromic effect）.
