细菌特殊染色方法(细菌染色方法)
1.细菌有哪些染色方法
一、常用的染色方法有革兰氏染色（最基本）、芽孢染色、荚膜染色、鞭毛染色等。
二、.1 革兰染色法 （1）取含金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌的混合菌液涂片、干燥、固定；（2）染色：用结晶紫染液染1min，水冲洗；卢戈碘液染1min，水冲洗；0.4%复红酒精溶液染30s，水冲洗；（3）吸干后镜检[2] 。
1.2 抗酸染色法 （1）取结核杆菌阳性的痰标本（已处理）涂片、干燥、固定。（2）染色：将石炭酸复红染液沸水浴10min，滴加2~3滴覆盖菌膜染色 5min，水冲洗，3%盐酸酒精脱色30s，水冲洗；碱性美兰复染30s，水冲洗。（3）吸干后镜检[3] 。
1.3 荚膜染色法 （1）取接种肺炎球菌死亡的小鼠腹腔液涂片、干燥、固定；（2）染色：用石炭酸复红染液染1min，水冲洗；95%酒精脱色5s水冲洗；20%鞣酸溶液媒染10min水冲洗；0.8%孔雀绿溶液染色1min，水冲洗；（3）吸干后镜检[4] 。
1.4 芽胞染色法 （1）取等量破伤风杆菌厌氧培养菌液和5%孔雀绿水溶液，放入小试管中充分混合，沸水浴20min；取上述混合液涂片、干燥、固定；（2）用 1%沙黄液复染10min，水冲洗；（3）干后镜检。
2.1 革兰染色 镜下，金黄色葡萄球菌染成紫色、球形，为革兰阳性菌；大肠埃希菌染成红色、杆状，为革兰阴性菌。革兰染色法是细菌学中最经典，应用最广泛的染色法之一。脱色是影响革兰染色的关键步骤，脱色时间长短直接关系到染色结果的准确性[5] 。脱色过度则革兰阳性菌可能被误染为革兰阴性菌，脱色不 够则革兰阴性菌可能被误染为革兰阳性菌，为此学生难以把握。现将原有四步染色法改为三步法，即把第三步酒精脱色和第四步复红复染合并一步进行，使用 0.4%复红酒精溶液作为复染剂，可达到脱色和复染双重目的。这样，就可以避免学生在四步法中因脱色时间不易掌握而造成染色的失败，减少重复性实验，提高了教学效果。
2.2 抗酸染色 镜下，结核分枝杆菌染成红色，为抗酸菌；背景和其他菌被染成蓝色，为非抗酸菌。传统的方法是滴加石炭酸复红染液于涂片上，用玻片夹夹住涂片以微火烟叶热，保持染液冒蒸汽约5min，此法学生容易使染液蒸干或使染液沸腾，从而影响染色效果和污染环境。改良后的方法是将染液直接加热改为水浴后使用，克服上述的缺点，且染色效果良好。适合实验教学使用。
2.3 荚膜染色 镜下，肺炎球菌菌体染成红色（成双排列），荚膜染成绿色，存在于菌体的周围。传统的荚膜染色是用结晶紫染液染色，菌体染成紫色，荚膜染成淡紫色或无色，菌体和荚膜之间反差小，不易分辨。改良后，增加了脱色、媒染、复染的步骤，使菌体和荚膜之间反差增大，易于观察，可用于学生实验和示教片的制作。
2.4 芽胞染色 镜下，破伤风杆菌的菌体染成红色，芽胞染成绿色。传统的方法是滴加石炭酸复红染液于涂片上并弱火加热，使染液冒蒸汽约5min，此法染液用量大，且容易污染衣物和实验台。现改为菌液和染液混合水浴加热初染，然后制备涂片、固定、复染，即节约时间，染液消耗又少，且菌体、芽胞对比鲜明。此法适用于教学标本片的制作。
三、简单染色法是利用单一染料对细菌进行染色的一种方法。
操作步骤
1.涂片：用灼烧灭菌冷却后的接种环挑取少量菌体与水滴充分混匀，涂成极薄的菌膜。
2.干燥：可自然晾干，或将涂片置于火焰高处微热烘干，但不能直接在火焰上烘烤。
3.固定：手执玻片一端，有菌膜的一面朝上，通过迅速通过火焰2-3次（用手指触涂片反面，以不烫手为宜）。
4.染色：加适量（以盖满菌膜为度）结晶紫染色液（或石炭酸复红液），染l~2min。
5.水洗：用自来冲洗至流下的水中无染色液的颜色时为止。
6.干燥
7.镜检
2.细菌染色方法有哪些
1 革兰氏染色法 是最常用的鉴别染色法之一。此法起始1881年，染色步骤是先用结晶紫或龙胆紫染液加于已固定好的标本上使之着色，其后加碘液作媒染剂，再用酒精脱色，最后用复红或沙黄复染。革兰氏染色的结果与培养基成分、培养条件及操作技术等有密切关系。如涂片太厚影响酒精脱色，革兰氏阴性菌则可染成革兰氏阳性菌。脱色时若酒精作用时间太长， ，荚膜不着色，包绕在菌体周围，成为一层透明的空圈。 5 荧光染色法 用荧光染料，如金胺、吖啶橙等进行染色。细菌用荧光染料着色后在荧光显微镜下检查，可在黑的背景中观察到细菌发出明亮的荧光。用荧光染色法检查细菌，有加快检查速度和提高阳性率等优点。
3.给细菌染色的方法都有几种,怎么操作,都用复红染色
给细菌染色的方法都有几种，怎么操作，都用复红染色
简单染色法：利用单一染料对细菌进行染色的一种方法.例如番红.
1.涂片：用灼烧灭菌冷却后的接种环挑取少量菌体与水滴充分混匀，涂成极薄的菌膜.
2.干燥：可自然晾干，或将涂片置于火焰高处微热烘干，但不能直接在火焰上烘烤.
3.固定：手执玻片一端，有菌膜的一面朝上，通过迅速通过火焰2-3次（用手指触涂片反面，以不烫手为宜）.
4.染色：加适量（以盖满菌膜为度）结晶紫染色液（或石炭酸复红液），染l~2min.
5.水洗：用自来冲洗至流下的水中无染色液的颜色时为止.
6.干燥
7.镜检
复染色：利用用两种以上染料对细菌进行染色.例如革兰氏染色法.
革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤，需要碱性染料（basic dye）初染液；媒染剂（mordant）；脱色剂（decolorising agent）和复染液（counterstain）.
碱性染料初染液的象在细菌的单染色法基本原理中所述的那样，而用于革兰氏染色的初染液一般是结晶紫（crystal violet）.媒染剂的作用是增加染料和细胞之间的亲和性或附着力，即以某种方式帮助染料固定在细胞上，使不易脱落，碘（iodine ）是常用的媒染剂.脱色剂是将被染色的细胞进行脱色，不同类型的细胞脱色反应不同，有的能被脱色，有的则不能，脱色剂常用95%的酒精（ethanol）.复染液也是一种碱性染料，其颜色不同于初染液，复染的目的是使被脱色的细胞染上不同于初染液的颜色，而未被脱色的细胞仍然保持初染的颜色，而且将细胞区分成G+和G-两大类群，常用的复染液为番红.
1.载玻片固定.在无菌操作条件下，用接种环挑取少量细菌于干净的载玻片上涂布均匀，在火焰上加热以杀死菌种并使其粘附固定.
2.草酸铵结晶紫染1分钟.
3.自来水冲洗，去掉浮色.
4.用碘-碘化钾溶液媒染1分钟，倾去多余溶液.
5.用中性脱色剂如乙醇（95%）或丙酮酸脱色30秒，革兰氏阳性菌不被褪色而呈紫色，革兰氏阴性菌被褪色而呈无色.
6.用番红染液或者沙黄复染30秒，革兰氏阳性菌仍呈紫色，革兰氏阴性菌则呈现红色.
4.给细菌染色的方法都有几种,怎么操作,都用复红染色吗
常用的细菌染色方法有简单染色和革兰氏染色。1、简单染色是利用单一染料对细菌进行染色，常用碱性染料如美蓝、结晶紫、碱性复红等。方法很简单：（一）制片：进行无菌涂片->；自然风干->；微火固定 （二）染色：例如用美蓝染色3-5分钟，滤纸吸干后就可以置于显微镜下观察了
2、革兰氏染色：使用非常普遍。方法：（1）用碱性染料结晶紫对菌液涂片进行初染（2）用碘液进行媒染（3）用乙醇冲洗以脱色（4）用一种与结晶紫不同颜色的碱性染料进行复染如沙黄。
这些实验都很简单，到时候你亲自做一遍就会很明白了，你现在只需弄清原理和简单过程就行。
5.细菌细胞染色的方式有哪几种,各有什么优缺点
质粒是细菌染色体外的遗传物质，多为环状双螺旋DNA分子。
质粒可以自身复制，质粒是自行复制单位，有的需与核质染色体的复制同步，称为严紧型复制（stringent replication）。 质粒编码细菌各种重要的生物学性状。
编码性菌毛的质粒称致育质粒或F质粒（fertility plasmid），具有F质粒的细菌有性菌毛。编码细菌各种毒力因子的质粒统称毒力质粒或Ⅵ质粒（virulence plasmid），如致病性大肠杆菌在黏膜上定居及产生毒素的能力可由不同质粒编码，其中K质粒编码对黏膜具有黏附活性的菌毛，ST质粒与LT质粒分别编码耐热肠毒素和不耐热肠毒素。
细菌对抗菌药物或重金属盐类的抗性则由R质粒（resistance plasmid）所决定。一个质粒可同时具有几种编码功能。
有的质粒还可以结合到染色体上，如F质粒在变形杆菌内是独立存在的，但在大肠杆菌内则可与染色体结合，这种质粒称为附加体（episome）。 转座因子 （transposable element）近年来发现微生物的某些DNA片段作为一个独立单位可在染色体上移动，此种移动甚至可发生在不同种细胞之间。
这种可移动的DNA片段称之为转座因子。细菌的转座因子有三种类型：插入序列（insert sequence,IS）、转座子（transposon,Tn）以及某些特殊的噬菌体。
毒力岛 （pathogen。质粒是细菌染色体外的遗传物质，多为环状双螺旋DNA分子。
质粒可以自身复制，质粒是自行复制单位，有的需与核质染色体的复制同步，称为严紧型复制（stringent replication）。 质粒编码细菌各种重要的生物学性状。
编码性菌毛的质粒称致育质粒或F质粒（fertility plasmid），具有F质粒的细菌有性菌毛。编码细菌各种毒力因子的质粒统称毒力质粒或Ⅵ质粒（virulence plasmid），如致病性大肠杆菌在黏膜上定居及产生毒素的能力可由不同质粒编码，其中K质粒编码对黏膜具有黏附活性的菌毛，ST质粒与LT质粒分别编码耐热肠毒素和不耐热肠毒素。
细菌对抗菌药物或重金属盐类的抗性则由R质粒（resistance plasmid）所决定。一个质粒可同时具有几种编码功能。
有的质粒还可以结合到染色体上，如F质粒在变形杆菌内是独立存在的，但在大肠杆菌内则可与染色体结合，这种质粒称为附加体（episome）。 转座因子 （transposable element）近年来发现微生物的某些DNA片段作为一个独立单位可在染色体上移动，此种移动甚至可发生在不同种细胞之间。
这种可移动的DNA片段称之为转座因子。细菌的转座因子有三种类型：插入序列（insert sequence,IS）、转座子（transposon,Tn）以及某些特殊的噬菌体。
毒力岛 （pathogenicity island,PAl）是20世纪90年代提出的一个新概念。PAI指病原菌的某个或某些毒力基因群，分子结构与功能有别于细菌染色体，但位于细菌染色体之内，因此称之为‘岛”。
PAI虽然是染色体的DNA片段，但两端往往具有重复序列与插入元件，其G+C%及密码使用与细菌染色体有明显差异，分子量多为30~40kb，也有达100kb者。
