灭菌具体方法(灭菌的具体方法)
1.灭菌的具体方法有哪些
(1)加热灭菌法 利用高温来杀死微生物（超过最高生长温度）的方法。
加热灭菌的原理：当高温作用于微生物时，首先引起细胞内生理生化反应速率加快，机体内对温度敏感的物质如蛋白质、核酸等，随着温度的增高而遭受不可逆的破坏，尽而导致细胞内原生质体的变化、酶结构的破坏，从而使细胞失去了生活机能上的协调，停止了生长发育。随着高温的继续作用，细胞内原生质便发生凝固，酶结构完全破坏，活动消失，生化反应停止，渗透交换等新陈代谢活动消失，细胞死亡。
加热灭菌可分干热灭菌和湿热灭菌两大类。 1）干热灭菌 利用灼烧或干热空气灭菌而没有饱和水蒸气参加的灭菌法称为干热灭菌法。
由于干热灭菌使用方便，方法简单，故在生产上广泛应用。如火焰灭菌法：直接利用火焰把微生物烧死，故又称焚烧灭菌法。
采用此法灭菌既彻底又迅速，但只适用于金属制的接种工具、试管口及污染物品等的处理。热空气灭菌法：即在电热恒温干燥箱中利用干热空气来灭菌。
2）湿热灭菌 即利用蒸汽进行灭菌的方法。湿热灭菌又分为高压、常压、间歇灭菌和巴氏灭菌4种。
①高压蒸汽灭菌 由于高压蒸汽具有较强的穿透力和较常压高的温度，能大大缩短灭菌时间，提高工作效率，加之蛋白质在湿热条件下容易变性，在热蒸汽条件下，细菌的芽孢在120℃，经20~30分钟可全部被杀死。如灭菌材料体积较大，不易被穿透时，可将压力增加到0.152兆帕，延长至1~2小时。
在高压蒸汽灭菌中，灭菌温度随蒸汽压力的增加而升高（图2-6）。 图2-6 高压蒸汽灭菌锅 在使用高压灭菌锅时，要完全排出锅内的空气而以饱和蒸汽代之。
如果空气不排除干净，则锅内温度将低于同样压力下由纯饱和蒸汽产生的温度，影响灭菌效果。 此法适用于各种耐热物品的灭菌，如一般培养基、生理盐水等各种溶液、玻璃器皿、工作服等。
所采用的蒸汽压力与时间，应根据待灭菌物品的性质、体积与容器类型等决定。 ②常压蒸汽灭菌 这是采用自然压力、100℃蒸汽进行灭菌的方法。
它设备简单、成本低，当前使用最广泛。只要砌一个炉灶，买1~2只大锅，上面用砖和水泥砌成，也可用大铁桶、木桶等，体积大小可自行决定，但不宜过大，以装800~1500瓶为好。
设计常压灶时应注意的问题：大小根据生产规模来定，灶顶部最好制成拱圆形，这样冷凝水可沿灶的内壁下流而不会打湿棉塞；灶仓内要有层架结构，以便分层装入灭菌物；灶上应安装温度计，可随时观察灶内温度的变化；因灭菌时间长，锅内水不够蒸发，故容量大的灶要安装加水装置；灶仓的密闭程度要尽可能高，这样既提高灭菌效果，又节省燃料。菇农在生产中还常用一种小型蒸汽发生装置，引出蒸汽后直接通到下边用木条堑起、四周用多层塑料布密封的菌袋堆中进行常压灭菌。
这种方法不用建灶，简便省工（图2-7）。常压灭菌一般水烧开后保持8~10小时，闷一夜即可。
图2-7 简易常压灭菌法 ③常压间歇蒸汽灭菌法 这是利用常压蒸汽反复几次灭菌的方法。具体做法是将待灭菌物品放在锅内，100℃处理1小时左右，杀死微生物的营养细胞，让其冷却至30℃左右，此时芽胞会萌发，再以同样方法加热处理，反复3次，可达到灭菌目的。
该方法可用于不耐高温的药品、营养物、特殊培养基的灭菌。 ④低温巴氏灭菌法 即在60~70℃下，经一定时间，杀死有害微生物的方法。
适应于不耐高温的物品消毒。有些培养基，在高温下遭到破坏，用此法既可杀死致病微生物的营养体，又能使培养基的成分不致受到严重破坏。
食用菌生产中培养料堆积发酵工艺，就是利用这个原理杀死其中的病虫、杂菌。 （2）过滤除菌法 又分液体过滤和空气过滤两种，就是采用机械的方法，设计一种滤孔比细菌还小的筛子，做成各种过滤器，通过机械过滤，只让液体培养基或空气从筛孔流出，各种微生物菌体则留在筛子上，从而达到除菌的目的。
这种方法适用于对热不稳定的体积小的液体培养基（如动物血清、蛋白质、酶、维生素等）及气体的灭菌。超净工作台的工作原理就是将带菌空气通过过滤灭菌形成无菌空气，从风洞中吹出，来造成工作台范围的无菌状态。
过滤灭菌的最大优点是不破坏培养基中各种物质的化学成分。常用的过滤器有用硅藻土制的、石棉制的、陶瓷土制的，也有用火棉胶、硝化纤维素滤膜制成的。
（3）辐射灭菌法 利用辐射产生的能量进行杀菌的方法称辐射灭菌。辐射可分电离辐射和非电离辐射两种，α-射线、β-射线、γ-射线、X-射线、中子和质子、微波等属电离辐射，紫外线、臭氧、日光为非电离辐射。
1）紫外线灭菌 紫外线杀菌的原理是利用紫外线的辐射作用。用灯管直接照射细菌使其发生光化学反应，将细菌细胞质诱导形成胸腺嘧啶双聚体，从而抑制DNA的复制而发生变性、致死。
另一方面，空气在紫外线照射下产生的臭氧（O3），也具有一定的杀菌作用。紫外线的有效作用距离为1.2~2.0米。
紫外灯一般悬吊在接种室或培养室的上方，个数依房间大小而定，容1~2个人操作的接种室，安装一个30瓦的紫外灯就可以了。在每次接种前，应将所需的器具一起放入接种室（箱）内，然后打开紫外灯照射。
如果接种室体积较大，开灯照射2小时。
2.灭菌方法有哪些
1.干热灭菌法
1.1灼烧与火焰灭菌：灼烧主要是用于接种工具灭菌，在火焰上灼烧即可达到彻底灭菌，火焰灭菌通常用于无菌操作中，将试管口、玻璃瓶口、硅氟塑料塞等反复通过火焰数次，利用火焰对管口等进行灭菌，阻止管口污染，作为无菌操作过程中的辅助灭菌手段。
1.2干烤灭菌：利用热辐射及干热空气进行灭菌。一般将待检灭菌的物品如金属、玻璃、陶瓷制品包装后，均可在烤箱内干热灭菌。通常加热至160℃，保温2h可完全灭菌。但不宜超过170℃，玻璃量具易变形。降温过速，骤冷易引起玻璃器皿炸裂。干热灭菌时装入干烤箱内的物品切勿紧密，应有空隙，利于热空气流动，过密，致使温度不均，部分物品灭菌不彻底。
2.湿热灭菌法
通过加压提高蒸汽温度，用高压蒸汽灭菌，穿透力强，温度高，灭菌效果最好。
注意事项：1.完全排除高压灭菌器内的冷空气。有冷空气存在时，在同一表压下所达到的温度值要低，而冷空气排出越少，温度就低得越多。在高压蒸汽灭菌时，为保证达到规定的温度，必须将冷空气完全排除。否则，虽然压力达到，而温度达不到规定的要求，灭菌就不彻底。
3.紫外线 杀菌谱广，但穿透力弱，影响因素多，杀菌效能受到一定限制。
紫外线消毒效果与紫外线强度、照射时间、温度与湿度等因素有关。
我国规定紫外灯照射强度距离1m处不低于70μw/cm2。一般紫外灯使用超过100h，则应更换。表面有尘土，降低灭菌效果。紫外灯杀菌的温度以20~40℃，相对湿度40%~60%为宜。
3.常用的灭菌方法有哪些
原发布者：honey_琴
常用灭菌方法简介一、辐射灭菌法本法系指灭菌物品置于适宜放射源辐射的γ射线或适宜的电子加速器发生的电子束中进行电离辐射而达到杀灭微生物的方法。本法最常用的60Co-γ射线辐射灭菌。医疗器械、容器、生产辅助用品、不受辐射破坏的原料药及成品等均可用本法灭菌。采用辐射灭菌法灭菌后的产品其SAL应《10-6。γ射线辐射灭菌所控制的参数主要是辐射剂量（指灭菌物品的吸收剂量）。该剂量的制定应考虑灭菌物品的适应性及可能污染的微生物最大数量及最强抗辐射力，事先应验证所使用的剂量不影响被灭菌物品的安全性、有效性及稳定性。常用的辐射灭菌吸收剂量为25KGy。对最终产品、原料药、某些医疗器材应尽可能采用低辐射剂量灭菌。灭菌前，应对被灭菌物品微生物污染的数量和抗辐射强度进行测定，以评价灭菌过程赋予该灭菌物品的无菌保证水平。灭菌时，应采用适当的化学或物理方法对灭菌物品吸收的辐射剂量进行监控，以充分证实灭菌物品吸收的剂量是在规定的限度内。如采用与灭菌物品一起被辐射的放射性剂量计，剂量计要置于规定的部位。在初安装时剂量计应用标准源进行校正，并定期进行再校正。60Co-γ射线辐射灭菌法常用的生物指示剂为短小芽孢杆菌孢子（）。二、干热灭菌法本法系指将物品置于干热灭菌柜、隧道灭菌器等设备中，利用干热空气达到杀灭微生物或消除热原物质的方法。适用于耐高温但不宜用湿热灭菌法灭菌的物品灭菌，如玻璃器
4.常用的消毒灭菌的方法有哪些
消毒灭菌的方法 （一）物理消毒灭菌法 利用物理因子杀灭微生物的方法.包括热力消毒灭菌、辐射消毒、空气净化、超声波消毒和微波消毒等。
1.热力消毒灭菌 高温能使微生物的蛋白质和酶变性或凝固（结构改变导致功能丧失），新陈代谢受到障碍而死亡，从而达到消毒与灭菌的目的.在消毒中，热可分为湿热与干热两大类。 干热是指相对湿度在20%以下的高热，干热消毒灭菌是由空气导热，传热效果较慢.一般繁殖体在干热80-100℃中经1小时可以杀死，芽胞需160-170℃经2小时方可杀死。
（1）燃烧法 是一种简单、迅速、彻底的灭菌方法，因对物品的破坏性大，故应用范围有限。 烧灼法：一些耐高温的实验器械（金属、搪瓷类），在急用或无条件用其他方法消毒时可采用此法.将器械放在火焰上烧灼1-2分钟.若为搪瓷容器，可倒少量95%乙醇，慢慢转动容器，使乙醇分布均匀，点火燃烧至熄灭约1-2分钟.采集作细菌培养的标本时，在留取标本前后（即启盖后，闭盖前）都应将试管（瓶）口和盖子置于火焰上烧灼，来回旋转2-3次。
燃烧时要注意安全，须远离易燃易爆物品，如氧气、汽油、乙醚等.燃烧过程不得添加乙醇，以免引起火焰上窜而致灼伤或火灾.锐利刀剪为保护刀锋，不宜用燃烧灭菌法。 焚烧：某些特殊感染，如破伤风、气性坏疽、绿脓杆菌感染的敷料，以及其它已污染且无保留价值的物品，如污纸、垃圾等，应放入焚烧炉内焚烧，使之炭化。
（2）干烤法 电热烤箱：利用烤箱的热空气消毒灭菌。烤箱通电加热后的空气在一定空间不断对流，产生均一效应的热空气直接穿透物体.一般繁殖体在干热80-100℃中经1小时可以杀死，芽胞、病毒需160-170℃经2小时方可杀死.热空气消毒灭菌法适用于玻璃器皿、瓷器以及明胶海棉、液体石腊、各种粉剂、软膏等.灭菌后待箱内温度降至50-40℃以下才能开启柜门，以防炸裂。
微波消毒：微波是一种高频电磁波，其杀菌的作用原理，一为热效应，所及之处产生分子内部剧烈运动，使物体里外湿度迅速升高；一为综合效应，诸如化学效应、电磁共振效应和场致力效应。目前已广泛应用于食品、药品的消毒，用微波灭菌手术器械包、微生物实验室用品等亦有报告.若物品先经1%过氧乙酸或0.5%新洁尔灭湿化处理后，可起协同杀菌作用，照射2分钟，可使杀芽胞率由98.81%增加到99.98%-99.99%。
微波对人体有一定危害性，其热效应可损伤眼睛晶状体等，长时间照射还可致神经功能紊乱.使用时可设置不透微波的金属屏障或戴特制防护眼境等。 湿热消毒灭菌 由空气和水蒸气导热，传热快，穿透力强，湿热灭菌法比干热灭菌法所需温度低、时间短。
（1）煮沸法 将水煮沸至100℃，保持5-10分钟可杀灭繁殖体，保持1-3小时可杀灭芽胞.在水中加入碳酸氢钠至1%-2%浓度时，沸点可达105℃，能增强杀菌作用，还可去污防锈.在高原地区气压低、沸点低的情况下，要延长消毒时间（海拔每增高300m，需延长消毒时间2分钟）.此法适用于不怕潮湿耐高温的搪瓷、金属、玻璃、橡胶类物品。 煮沸前物品涮洗干净，打开轴节或盖子，将其全部浸入水中.大小相同的碗、盆等均不能重叠，以确保物品各面与水接触.锐利、细小、易损物品用纱布包裹，以免撞击或散落.玻璃、搪瓷类放入冷水或温水中煮；金属、橡胶类则待水沸后放入.消毒时间均从水沸后开始计时.若中途再加入物品，则重新计时，消毒后及时取出物品，保持其无菌状态。
经煮沸灭菌的物品.“无菌”有效期不超过6小时。 （2）高压蒸汽灭菌法 高压蒸汽灭菌器装置严密，输入蒸汽不外逸，温度随蒸汽压力增高而升高，当压力增至103-206kPa时，湿度可达121.3-132℃.高压蒸汽灭菌法就是利用高压和高热释放的潜热进行灭菌，为目前可靠而有效的灭菌方法.适用于耐高温、高压，不怕潮湿的物品，如敷料、手术器械、药品、细菌培养基等。
潜热是指当lg100℃的水蒸汽变成lg100℃水时，释放出2255.2J的热量。 高压蒸汽灭菌的关键问题是为热的传导提供良好条件，而其中最重要的是使冷空气从灭菌器中顺利排出.因为冷空气导热性差，阻碍蒸汽接触欲灭菌物品，并且还可减低蒸汽分压使之不能达到应有的温度。
手提式高压蒸汽灭菌器：为金属圆筒，分为二层，隔层内盛水，有盖，可以旋紧，加热后产生蒸汽。锅外有压力表，当蒸汽压力升高时，温度也随之相应升高。
该灭菌器体积小，可自发蒸汽，便于携带。 操作方法如下：在灭菌器中盛水3000ml；将拟灭菌的物品随同盛装的桶放入灭菌器内；将盖子上的排气软管插于铝桶内壁的的方管中；盖好盖子，拧紧元宝螺丝，勿使漏气；锅下加热，打开排气活门，放出冷空气（一般在水沸后排气10-15分钟左右），关闭放气活门，使压力逐渐上升至103kPa，温度达121.3℃，维持20分钟后，排气至“0”时，慢慢打开盖子.如果突然开盖，冷空气大量进入，蒸汽凝成水滴，使物品潮湿，且玻璃类易发生爆裂。
卧式高压蒸汽灭菌器：其结构原理同手提式高压蒸汽灭菌器，因其体积大，一次可灭菌大量物品.操作人员须经专业培训，再关闭放气开关，待夹层压力表达到灭菌所需压力时（约10分钟后），将蒸汽控制阀移至“消毒”位置，使蒸汽。
5.灭菌方法有哪些
1.干热灭菌法1.1灼烧与火焰灭菌：灼烧主要是用于接种工具灭菌，在火焰上灼烧即可达到彻底灭菌，火焰灭菌通常用于无菌操作中，将试管口、玻璃瓶口、硅氟塑料塞等反复通过火焰数次，利用火焰对管口等进行灭菌，阻止管口污染，作为无菌操作过程中的辅助灭菌手段。
1.2干烤灭菌：利用热辐射及干热空气进行灭菌。一般将待检灭菌的物品如金属、玻璃、陶瓷制品包装后，均可在烤箱内干热灭菌。
通常加热至160℃，保温2h可完全灭菌。但不宜超过170℃，玻璃量具易变形。
降温过速，骤冷易引起玻璃器皿炸裂。干热灭菌时装入干烤箱内的物品切勿紧密，应有空隙，利于热空气流动，过密，致使温度不均，部分物品灭菌不彻底。
2.湿热灭菌法通过加压提高蒸汽温度，用高压蒸汽灭菌，穿透力强，温度高，灭菌效果最好。注意事项：1.完全排除高压灭菌器内的冷空气。
有冷空气存在时，在同一表压下所达到的温度值要低，而冷空气排出越少，温度就低得越多。在高压蒸汽灭菌时，为保证达到规定的温度，必须将冷空气完全排除。
否则，虽然压力达到，而温度达不到规定的要求，灭菌就不彻底。3.紫外线 杀菌谱广，但穿透力弱，影响因素多，杀菌效能受到一定限制。
紫外线消毒效果与紫外线强度、照射时间、温度与湿度等因素有关。我国规定紫外灯照射强度距离1m处不低于70μw/cm2。
一般紫外灯使用超过100h，则应更换。表面有尘土，降低灭菌效果。
紫外灯杀菌的温度以20~40℃，相对湿度40%~60%为宜。
