菌种鉴定方法(菌种鉴定的方法)

1.菌种鉴定的方法

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内容来自用户：于秀兰

菌种鉴定

篇一：菌种鉴定

中国工业微生物菌种保藏管理中心

CICC是我国唯一的国家级工业微生物菌种保藏管理中心，有近三十年菌种分类鉴定的历史，拥有先进的生物科学仪器和从事分类鉴定的专业化人员队伍。CICC承担全国工业微生物菌种的委托鉴定工作，所提供的菌种鉴定与评价技术服务获得“国家工商总局（SCIC）经营许可”，为国内科研机构、大专院校和生产企业等提供微生物菌种鉴定服务，涉及细菌、酵母、放线菌和丝状真菌等多类微生物。菌种鉴定手段包括形态学观察、生理生化特性鉴定、BIOLOG碳源自动分析鉴定、分子生物学鉴定、API细菌数值鉴定、功能性分析及功能基因、RAPD、SSCP、TLC薄层层析、全细胞脂肪酸分析鉴定、（G+C）mol%测定、DNA/DNA同源性测定等。

鉴定项目

序号服务项目菌种类别

1纯菌种鉴定（包含形态、理化、分子）细菌、酵母、放线菌、丝状真菌2功能基因鉴定（pheS、gryA、atpD等）乳杆菌、芽胞杆菌、双歧杆菌3产品微生物解析――

4产品污染菌种鉴定――

5菌群分析及纯种分离――

6细胞壁化学组分分析（氨基酸）细菌、放线菌

7细胞壁化学组分分析（糖）细菌、放线菌

8 DNA(G+C)mol%含量细菌、放线菌

9 DNA/DNA杂交细菌、酵母、放线菌、丝状真菌10脂肪酸分析细菌、放线菌CICCCICC

2.菌种鉴定常用的分离方法有哪些

菌种质量检测的目标包括菌丝形态、菌落特征以及子实体形态等方面。

质量检测常用方法如下： （1）建立标准的培养和观察方法 对于一个栽培品种各菌种的质量检测，实际上是以该品种典型的生物学特性（包括形态特征、生理生态特性、栽培习性）为参照标准进行比较，以检验菌种是否存在品种退化、菌种老化、病菌侵染、杂菌污染和品种混杂等质量问题。同时，菌种质量检测不仅要考虑从哪些方面来评价一个菌种的质量优劣，也要考虑用怎样的标准方法对菌种质量进行评价的问题。

因为一定的结果来源于一定的方法和一定的条件。方法和条件不同，结果就失去了可比性，也就无法鉴别，因此，需要建立标准。

这些标准包括：培养基、培养条件（温度、湿度、pH、光照等）、菌种的菌龄等。 （2）连续观察 在菌种生长过程中，要连续观察，一切不正常的现象只有在生长过程中才能表现出来。

而当菌种长满培养基表面后，其不正常现象往往会被菌种的过龄而掩盖。 （3）宏观检查 对食用菌母种、原种及栽培种的宏观检查要根据其培养特征来进行（参见前述有关内容），这是菌种生产者及使用者普遍使用的方法，简单易行，但需要有多年的从业经验与技术沉淀。

如被检菌种表现出菌落生长速度不一致、气生菌丝变稀疏或出现扇变菌落、菌落上过早出现色素、或不同特征的菌落混杂共存、或菌落上出现黑褐色、青灰色、黄褐色或红色的孢子堆，均可以确定该菌种存在质量问题。优质菌种外观菌丝洁白、密集粗壮，生长速度一致，齐发并进。

在生产实践中，广大菇农和专业工作人员总结出“纯、正、壮、润、香”的质量检查方法。这种应用感官识别菌种优劣，是经验的总结，能大致、快速地鉴定出菌种的优劣。

具体方法是： “纯”指菌种的纯度高，无杂菌感染，无斑块、无抑制线，无“退菌”、“断菌”现象等。 “正”指菌丝无异常，具有亲本正宗的特征，如菌丝纯白、有光泽，生长整齐，连结成块，具弹性等。

“壮”指菌丝发育粗壮，长势旺盛，分枝多而密，在培养基上恢复、定植、蔓延速度快。 “润”指菌种含水量适中，基质湿润，与瓶壁紧贴，瓶颈略有水珠，无干缩、松散现象。

“香”指具该品种特有的香味，无霉变、腥臭、酸败气味。 通过检测各种食用菌菌丝生长的色泽、速度、均匀度等特征是否正常，来判断菌种生长是否正常、是否可用，但辨别不了是否优质高产。

（4）显微镜检查 对菌丝体进行显微观察，可以确定菌丝粗细、分枝、隔膜、锁状联合等特性是否均一，是否与该栽培品种的典型特征一致（参见前述相关内容）。具有不同形态特征的菌丝体存在于同一菌种体中，表明该菌种存在质量问题；如果出现菌丝体重寄生现象，常表现出不同特征的菌丝体相互缠绕，或菌丝体中空变细，或在寄生点出现吸器等不正常现象。

镜检的方法是：挑取少量菌丝，置载玻片中央的水滴上，用解剖针或接种针拨散，盖上盖玻片，也可加碘酒或美蓝等染色后进行镜检。正常的菌丝一般透明、分枝状，有横隔和明显的锁状联合；异宗结合的食用菌，如仅有单核菌丝，不具结实性，不宜作菌种用；双核菌丝中，锁状联合多而密，则结菇力强，一般可认为是好菌种。

如： ①双孢菇 观察双孢菇单孢子萌发后的菌丝生长形态。凡菌丝洁白、健壮，保存时间较长时菌丝颜色不变，较耐28℃以上气温，生长在基质上平贴培养基表面，气生菌丝不多的，为同化能力较强，产量较高的菌株。

相反，菌丝生长初期好，很快变黄变稀，如蜘蛛丝一样，长出培养基表面菌丝较多的菌株产量较低。 ②香菇 观察香菇的双核菌丝，在斜面培养基上生长速度达到1.2厘米/天以上的，菌丝不十分粗壮和洁白，锁状连合频繁，锁状连合在菌丝间相距较近，且在观察面上分布均匀，一般均是高产和抗杂能力较强的菌株。

香菇出菇的密度与锁状连合有一定关系。 ③草菇 观察草菇菌丝，发现菌丝分枝角度大的，出菇率高，产量高。

菌丝分枝角度小、平行排列的，产量低。 各种食用菌的菌丝生长是否正常、是否可用，一般都以色泽、速度、均匀度等特征加以检测，但这并不能说明其是否优质高产。

（5）拮抗试验 也称对峙反应。同一种食用菌，经分离或杂交，将选育出许多不同的菌株，这些菌株的菌丝在形态上很难区别。

如不同编号的香菇菌种，都是白色绒毛状菌丝，镜检时均具有锁状联合等。在当前菌种管理工作尚不十分健全的情况下，“同名异种”、“同种异名”的现象普遍发生，要识别异同，可采用“拮抗试验”加以区别。

具体方法是： 用1支20毫米*200毫米的无底试管，中央部位装入长 5~7厘米的木屑麸糠培养基，两端压平并盖棉塞，灭菌后，两端各接入两株受检的菌种 1小块，25℃左右条件下培养，当两端菌丝往中央生长并相互接触后，把试管移至20℃、约300勒克斯的漫射光下继续培养，观察菌丝接触区有无对峙反应。若无褐色的带线出现，表示两个受检菌株的基因极相似或相同，是相同的菌株，仅编号不同，即同种异名。

如果受检菌株间形成带线，则表示是不同的菌株。 用平板进行拮抗试验测试，方法是在无菌的PDA培养基平板上各接入2个或多个被检菌株的菌种，在上述条件下培养，观察菌。

3.请问一下菌种鉴定的方法和实验步骤

实验步骤：菌种鉴定工作是各类微生物学实验室都经常遇到的基础性工作。

不论鉴定对象属哪一类，其工作步骤都离不开以下三步：①获得该微生物的纯种培养物；②测定一系例必要的鉴定指标；③查找权威性的鉴定手册。 一、经典分类鉴定方法 群体：菌落形态，在半固体或液体培养基中的生长状态等* 形态 个体：细胞形态，染色反应，各种特殊构造等* 营养要求：能源，碳源，氮源，生长因子等* 生理、生化反应 酶；产酶种类和反应物性等* 代谢产物：种类，产量，显色反应等* 经典指标 生态特性：生长温度，对氧的需要，宿主种类等* 生活史特点* 血清学反应* 噬菌体的敏感性* 其它 经典分类法 经典分类法是一百多年来进行微生物分类的传统方法。

其特点是人为地选择几种形态生理生化特征进行分类，并在分类中将表型特征分为主、次。一般在科以上分类单位以形态特征、科以下分类单位以形态结合生理生化特征加以区分。

* A. 能在 60 o C 以上生长 * B. 细胞大，宽度 1.3~1.8mm ………………… 1. 热微菌属 （ Thermomicrobium ） * B. 细胞小，宽度 0.4~0.8mm * C. 能以葡萄糖为碳源生长 * D. 能在 pH4.5 生长 …………………………… 2. 热酸菌属 （ Acidothermus ） * DD. 不能在 pH4.5 生长 …………………………………… 3. 栖热菌属 （ Thermus ） * CC. 不能以葡萄糖为唯一碳源 ……………… 4. 栖热嗜油菌属 （ 栖热嗜狮菌属 Thermoleophilum ） * AA. 不能在 60 o C 以上生长 二、现代分类鉴定方法 * 近年来，随着分子生物学的发展和各项新技术的广泛应用，促使微生物分类鉴定工作有了飞速发展。对微生物鉴定工作来说，已从经典的表型特征的鉴定深入到现代的遗传学特性的鉴定、细胞化学组分的精确分析以及利用电子计算机进行数值分类研究等新的层次上。

* （一）微生物遗传型的鉴定* DNA是除少数RNA病毒以外的一切微生物的遗传信息载体。每一种微生物均有其自己特有的、稳定的DNA成分和结构，不同微生物间DNA成分和结构的差异程度代表着它们间新缘关系的远近。

因此，测定每种微生物DNA的若干重要数据，是微生物鉴定中极其重要的指标：1. DNA的碱基组成（G+Cmol%）* 每一个微生物种的 DNA 中 GC mol% 的数值是恒定的，不会随着环境条件、培养条件等的变化而变化，而且在同一个属不同种之间， DNA 中 GCmol% 的数值不会差异太大，可以某个数值为中心成簇分布，显示同属微生物种的 GC mol% 范围。 DNA 中 GC mol% 分析主要用于区分细菌的属和种，因为细菌 DNA 中 GC 含量的变化范围一般在 25 %~ 75 %；而放线菌 DNA 中的 GC 比例范围非常窄 （37 %~ 51%） 。

一般认为任何两种微生物在 GC 含量上的差别超过了 10 %，这两种微生物就肯定不是同一个种。因此可利用 G+C mol %来鉴别各种微生物种属间的亲缘关系及其远近程度。

值得注意的是，亲缘关系相近的菌，其 G+C mol %含量相同或者近似，但 G+C mol %相同或近似的细菌，其亲缘关系并不一定相似，这是因为这一数据还不能反映出碱基对的排列序列，而且如放线菌的 DNA 的 GC mol% 在 37 ~ 51 之间，企图在这么小的范围内区分放线菌的几十个属显然是不现实的。要比较两种细菌的 DNA 碱基对排列序列是否相同，以及相同的程度如何，就需做核酸杂交试验。

1. DNA的碱基组成（G+Cmol%）* 1）每个生物种都有特定的GC%范围，因此后者可以作为分类鉴定的指标。细菌的GC%范围为25--75%，变化范围最大，因此更适合于细菌的分类鉴定。

* 2)GC%测定主要用于对表型特征难区分的细菌作出鉴定，并可检验表型特征分类的合理性，从分子水平上判断物种的亲缘关系。* 3）使用原则：* G+C含量的比较主要用于分类鉴定中的否定每一种生物都有一定的碱基组成，亲缘关系近的生物，它们应该具有相似的G+C含量，若不同生物之间G+C含量差别大表明它们关系远。

但具有相似G+C含量的生物并不一定表明它们之间具有近的亲缘关系。1. DNA的碱基组成（G+Cmol%）* 同一个种内的不同菌株G+C含量差别应在4~5%以下；同属不同种的差别应低于10~15%。

所以G+C含量已经作为建立新的微生物分类单元的一项基本特征，它对于种、属甚至科的分类鉴定有重要意义。* 若二个在形态及生理生化特性方面及其相似的菌株，如果其G+C含量的差别大于5%，则肯定不是同一个种，大于15%则肯定不是同一个属。

* 在疑难菌株鉴定、新种命名、建立一个新的分类单位时，G+C含量是一项重要的，必不可少的鉴定指标。其分类学意义主要是作为建立新分类单元的一项基本特征和把那些G+C含量差别大的种类排除出某一分类单元。

2.核酸的碱基组成和分子杂交：* 与形态及生理生化特性的比较不同，对DNA的碱基组成的比较和进行核酸分子杂交是直接比较不同微生物之间基因组的差异，因此结果更加可信。DNA-DNA 杂交 * DNA 杂交法的基本原理是用 DNA 解链的可逆性和碱基配对的专一性，将不同来源的 DNA 在体外加热解链，并在合适的条件下，使互补的碱基重新配对结合成双链 DNA ，然后根据能生成双链的情况，检测杂合百分数。

如果两条单链 DNA 的碱基顺序全部相。

4.食用菌菌种质量鉴定的内容和方法有哪些

1、外观直接观察鉴定

外观菌种，菌丝浓白、粗壮、富有弹性，则生命力强；如果菌种菌丝萎缩，干燥无色泽，或菌丝体自溶产生了多量红褐色液体，则生活力已变弱，不宜再用；木块菌种如仍保持硬实，则属于生活力强的菌种，如若木块变得软化松散，则已老化，不宜使用。

2、培养观察鉴定

对于分离、选育和引进的菌种，通过培养，观察菌丝体对干、湿度和温度等方面的适应特性。如将菌丝体置于偏干、偏湿和干湿相宜的条件下培养，若菌丝在前两种条件下能良好生长，而在干湿相宜的条件下生长最佳，则说明是好菌种。

3、液体培养鉴定

配制2%糖水溶液，经常规灭菌消毒，挑取黄豆（4165, 7.00, 0.17%）粒大的菌块，放入100毫升上述溶液中，置于25——28℃温度下培养3——7天后，若液面出现气泡，产生“油皮”，发生浑浊现象，说明菌种本身有杂菌；如果苗块下沉，或迟迟才长出很薄的菌丝层，则说明菌种生活力弱；如若液面四周的菌丝生长快，且浓白呈棉絮状，则表明菌种生命力强。

4、锯木屑瓶栽鉴定和周期产量鉴定

瓶栽鉴定的做法与培育栽培的方法相似，把锯木屑培养料装得松一些，适当加大湿度，把需要鉴定的菌种接种于培养基中，做好记录，在26℃恒温下培养15天。然后使温度降至15——20℃，并给予较好的散射光条件，再培育半个月左右，在瓶壁和料面上就会出现子实体原基和少量子实体。若未发现杂菌和异常现象，再把菌种接在木段上，做周期产量鉴定。如果子实体生长旺盛，高产优质，具备优良品种特性，并且没有杂菌混生，说明菌种可靠，可以保存并投入大面积生产。实践证明，以上菌种质量的鉴定方法是比较科学的，可以筛选出优良菌种，为广大用户服务。

5.微生物上,鉴别细菌菌种的方法有

首先如果你的菌株是自然界中分离得到，就只能鉴定到种，不能鉴定到株，因为多多少少和其他株系的细菌有区别，即便你做了一些特征的鉴定，发现和某一株细菌一模一样，你也没有理由说你的细菌就是那一株细菌，因为你不可能把所有的特征都做完，株和株之间的关系就相当于不同的人之间的关系，世界上不可能有完全相同的两个人。除非你知道你的细菌本来就是某一株细菌扩增出来的（而且要保证没有变异，否则就是一个新株），可是这样就没必要鉴定了。

菌种鉴定一般就只要提取基因组DNA，然后PCR扩增16srDNA片段，上GeneBank或者Eztaxon对比即可。一般序列相似度在97%以上就可以认为是同种细菌（当然也有例外，DNA序列仅仅是一个参考指标）。

6.如何鉴定菌种

在杏鲍菇、白灵菇生产中，只有具备优良的菌种，通过科学的培育管理，才能实现优质、高产、高效。因此菌种的优劣是事关千家万户的切身利益和菌种生产厂家信誉的大事。在现实生产中，也常发现有的菌种厂以赢利为目的，粗制滥造。加之有些菇农对菌种质量缺乏识别能力，致使在生产中减产、绝收，造成巨大的经济损失。因此严格菌种质量，加强对菌种的鉴定和识别是当前食用菌发展中的首要任务，也是最主要的技术环节和要求。

菌种质量的鉴定，严格地讲，应从形态、生理、栽培和经济效益等方面进行综合检测和评价。但要完成各种指标，除了需掌握一定的基础知识和基本技术外，还需具备一定的仪器设备及人力物力和时间。因此，一般生产者是很难完成的。这里仅将几种常用、简便、易行的方法予以介绍，供生产者参考。

(1)直接观察。

对引进的母种，首先要用肉眼观察包装是否符合要求，棉塞有无松动，试管有无破损，棉塞中有无杂菌和病虫害侵染，菌丝色泽是否正常、有无老化等现象。购进或自制的原种，瓶内菌丝应粗壮整齐、分枝浓密、色浓白呈绒毛状，说明生长旺盛。如瓶底出现黄水、菌丝萎缩与瓶壁脱离，或出现原基扭结，说明菌种老化应淘汰。（2）菌种纯度检查。

杏鲍菇菌丝是纯白色的，白灵菇菌丝较杏鲍菇菌丝稍浅些。如在菌种管或菌种瓶中出现其他颜色的菌丝或孢子（绿色、黄色、黑色等），则说明菌种不纯，被杂菌污染不能使用。如果在接菌时发现菌种有异味也说明菌种被杂菌污染，不能使用。（3）吃料能力鉴定。

将母种接入最佳配方的原种培养基中，或将原种接入栽培袋中观察菌丝生长情况。经1周的培养，如果菌种块能很快萌发并迅速向四周的培养料中生长伸展，说明菌种的吃料能力强。反之，菌种块萌发后生长缓慢，迟迟不向四周和料层深处伸展，则表明菌种对培养料的适应能力差。（4）观察菌丝长势。

可先将供测的菌种接入其适宜的试管培养基上进行培养，如果菌丝生长整齐浓密、健壮有力，则表明为优良菌种。若菌丝生长缓慢或长速太快，稀疏无力，参差不齐，容易衰老，则表明菌种质劣。（5）栽培试验观察。

这是菌种质量鉴定最可靠的方法。通过一定的栽培试验，凡具备优质高产、抗杂能力强和遗传性稳定的菌株，才是优良和可推广应用的品种。

7.细菌鉴定办法有哪些,详细些哦~~

一 淀粉水解试验 （一）实验原理 细菌对大分子的淀粉、蛋白质和脂肪不能直接利用，必须靠产生的胞外酶，如淀粉酶、蛋白酶和脂肪酶将大分子物质分解。

胞外酶能分泌扩散到细胞外，将物质分解成小单位如糖、氨基酸、甘油与脂肪酸。这些小单位的物质能被细菌吸收和利用。

水解过程可通过底物的变化来证明，如细菌水解淀粉的区域，用碘测定不再产生蓝色；水解明胶可观察到明胶被液化；脂肪水解后产生脂肪酸改变培养基的pH，其中的中性红指示剂使培养基从淡红色变为深红色。（二）实验方法 将淀粉培养基溶化后，冷至45℃左右，以无菌操作制成平板。

取18-24h的纯培养物点于平板上，每皿可点种3-5个菌株，适温培养2-4d，形成菌落后，在平板上滴加卢戈氏碘液，以铺满菌落周围为度，平板成蓝色。如果菌落周围有无色透明圈出现，说明淀粉已经被水解，实验为阳性，否则为阴性。

透明圈的大小一般说明水解淀粉的能力。（三）实验试剂的配制 肉汤蛋白胨琼脂成分：蛋白胨10g，牛肉膏3g，氯化钠5g，琼脂17g，蒸馏水1000mL,pH7.2。

淀粉培养基制法：在肉汤蛋白胨琼脂中添加0.2%的可溶性淀粉，校正pH值至7.6，分装三角瓶，121℃ 20min灭菌备用。卢戈氏（Lugol）碘液：碘片1g，碘化钾2g，蒸馏水300ml，先将碘化钾溶解在少量水中，再将碘片溶解在碘化钾溶液中，混匀，定容。

二 糖发酵试验（一）实验原理 单糖发酵是将葡萄糖，乳糖或麦芽糖等分别加入蛋白胨水培养基内，使其最终浓度为0.75-1%。并加入一定量酚红指示剂及小倒管，制成单糖发酵管，接种细菌经37℃培养18-24小时，若能分解糖产酸则酚红指示剂由红变黄，若能分解甲酸有CO2和H2等气体形成，小倒管内则聚集有气泡；不分解，则指示剂不变色。

（二）实验材料 1.菌种：大肠杆菌，伤寒杆菌18-24小时琼脂斜面培养物。 2.培养基：葡萄糖发酵管，乳糖发酵管等。

（三）实验方法1.将伤寒杆菌，大肠杆菌按照液体接种方法分别接种于葡萄糖及乳糖发酵管内。 2.置37℃孵箱培养18-24小时。

3.观察结果：由于一些细菌能分解某种糖类产酸，所以培养基中pH下降到7.0以下，在酚红指示剂的显示下，培养基颜色由红变黄。产酸者以“+”表示，如果同时产生气体，则培养基中小倒管内有气泡出现，此乃产酸又产气，以“⊕”表示，不分解，则指示剂不变色，用“-”表示。

（四）实验结果 伤寒杆菌 大肠杆菌 葡萄糖 + ⊕ 乳 糖 - ⊕ （五）实验试剂的配制1.单糖发酵管的制备： 成分：蛋白胨水培养基 100ml ,0.2%酚红 1ml ，所需糖（葡萄糖或乳糖）0.75-1g 制法： （1）将上述成分溶化，混匀分装于内含有倒置小玻璃管的小试管中，每管约2ml，加塞。 （2）小倒管排气，灭菌（8-10磅，20-30分钟），贮存备用。

用途：供单糖发酵试验用。 2.0.2%酚红配制法 酚红（phenol red）0.2g ,0.lmol/LNaOH 8ml ，蒸馏水 92ml 将酚红入研钵徐徐加入0.lmol/LNaOH研磨，再补足蒸馏水即成。

若需长时间保存，可高压灭菌后贮存备用。 三 甲基红（M.R）试验（一）实验原理 某些细菌如大肠杆菌等分解葡萄糖产生丙酮酸，继而分解为甲酸、乙酸、乳酸等，使培养基pH值降至4.5以下，加入甲基红指示剂呈红色，此为阳性反应；若产酸量少或产生的酸进一步转化为醇、醛、气体和水等，则培养基的酸碱度仍在pH 6.2以上，加入甲基红指示剂呈现黄色，为阴性反应。

（二）实验材料1. 菌种：大肠杆菌，产气杆菌18-24h琼脂斜面培养物。 2. 培养基：葡萄糖蛋白胨水培养基。

3. 试剂：甲基红试剂。 （三）实验方法1. 分别将大肠杆菌，产气杆菌接种于两支葡萄糖蛋白胨水培养基中。

2. 置37℃培养2-3天取出，分别滴加甲基红试剂2-3滴，混匀，观察结果。 （四）实验结果 大肠杆菌：+，产气杆菌：-。

（五）实验试剂的配制1.甲基红试剂的配制 甲基红 0.04g, 95%酒精 60ml ， 蒸馏水 40ml 。先使甲基红溶解于酒精中，再加入蒸馏水，混合，摇匀即成。

2.葡萄糖蛋白胨水培养物 成分：蛋白胨5g 葡萄糖5g 制法： （1）将上述成分溶解于蒸馏水中。 （2）调节pH至7.6，用滤纸过滤除渣。

（3）分装中试管，每管约3-4ml，灭菌后备用。 用途：供甲基红及V-P试验用。

四 产吲哚（indole）试验（一）实验原理 某些细菌如大肠杆菌，变形杆菌等具有色氨酸酶，能分解蛋白胨水培养基中的色氨酸，产生靛基质（无色吲哚），再与欧立希试剂（对二甲基氨基苯甲醛）反应，形成红色化合物—玫瑰吲哚，即为阳性反应。 （二）实验材料1. 菌种：大肠杆菌，伤寒杆菌18-24小时琼脂斜面培养物。

2. 培养基：蛋白胨水培养基。 3. 试剂，欧立希（Ehrlich）试剂（对二甲基氨基苯甲醛） （三）实验方法1. 分别将大肠杆菌，伤寒杆菌接种于两支蛋白胨水培养基中。

2. 置37℃培养2-3天后，每管沿管壁各加欧立希试剂0.5-1ml于培养液面上，待1-2分钟后观察结果：在交界面出现玫瑰红色环即为吲哚试验阳性，无红色环即为阴性。 （四）实验结果 大肠杆菌：+ ；伤寒杆菌：- 。

（五）实验试剂的配制1.蛋白胨水培养基的制备 成分：蛋白胨10g 氯化钠5g 蒸馏水1000ml 制法： （1）先用少量蒸馏水将蛋白胨和氯化钠相混合溶解，再加足蒸馏水量。 。